Fluorescently Labeled Human Papillomavirus Pseudovirions for Use in Virus Entry Experiments
Fluorescently Labeled Human Papillomavirus Pseudovirions for Use in Virus Entry Experiments
复制标题
用于病毒进入实验的荧光标记人乳头瘤病毒假病毒粒子
DOI：
10.1002/9780471729259.mc14b04s37
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发表时间：
2015
影响因子：
--
通讯作者：
Schelhaas
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Samperio Ventayol;Schelhaas
人乳头瘤病毒（HPV）感染皮肤或粘膜表皮。简单的衣壳由一个主要的衣壳蛋白L1，一个次要的衣壳蛋白L2和一个大约8kB大小的双链环状DNA组成。基于HPV的载体[即假病毒粒子（PsV）]的发展作为研究初始感染的工具，促进了我们对HPV进入的理解。荧光分子与这些PsV的共价偶联允许跟踪病毒前往细胞核，即复制地点。在第一部分中，我们描述了一种简单的方法来共价标记HPV PsV，保持其传染性。在这种方法中，在一步化学反应中，与活性琥珀酰亚胺酯偶联的荧光团共价附着在病毒粒子中的胺残基上。在本单元的第二部分，概述了几种使用荧光标记病毒粒子进入活细胞和固定细胞研究的测定方法。©2015 by John Wiley & Sons, Inc。
Human papillomaviruses (HPV) infect skin or mucosal epidermis. The simplistic capsid consists of a major capsid protein L1, a minor capsid protein L2, and a double‐stranded circular DNA of about 8kB in size. The development of HPV‐based vectors [i.e., pseudovirions (PsV)] as tools to study the initial infection has facilitated our understanding of HPV entry. The covalent coupling of fluorescent molecules to these PsV allows following the viruses en route to the nucleus, i.e., the site of replication. In the first section, we describe a facile method to covalently label HPV PsV that retain their infectivity. In this method, fluorophores coupled to a reactive succinimidyl ester are covalently attached to amine residues in the virion in a one‐step chemical reaction. In the second section of this unit, several assays are outlined that use the fluorescently labeled virions for entry studies in live and fixed cells. © 2015 by John Wiley & Sons, Inc.
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