Unambiguous Assignment of Short‐ and Long‐Range Structural Restraints by Solid‐State NMR Spectroscopy with Segmental Isotope Labeling
Unambiguous Assignment of Short‐ and Long‐Range Structural Restraints by Solid‐State NMR Spectroscopy with Segmental Isotope Labeling
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通过分段同位素标记的固态核磁共振波谱明确分配短程和长程结构约束
DOI：
10.1002/cbic.201402446
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
C. Ritter
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
T. Schubeis;Thorsten Lührs;C. Ritter
我们提出了一种有效的方法，在不损失信号强度的情况下，降低不溶性蛋白质组件的固态核磁共振光谱的光谱复杂性。该方法是基于片段同位素标记，利用从Nostoc点形的分裂内dna。我们发现，HET - s的片段13C，15N标记的朊病毒结构域在保留野生型结构和光谱质量的同时，显著减少了光谱重叠。因此，从单个二维13C、13C互相关光谱中收集了大量明确的距离限制。所观察到的共振可以明确地识别为分子内，而不需要制备稀释的、不太敏感的样品。
We present an efficient method for the reduction of spectral complexity in the solid‐state NMR spectra of insoluble protein assemblies, without loss of signal intensity. The approach is based on segmental isotope labeling by using the split intein DnaE from Nostoc punctiforme. We show that the segmentally 13C,15N‐labeled prion domain of HET‐s exhibits significantly reduced spectral overlap while retaining the wild‐type structure and spectral quality. A large number of unambiguous distance restraints were thus collected from a single two‐dimensional 13C,13C cross‐correlation spectrum. The observed resonances could be unambiguously identified as intramolecular without the need for preparing a dilute, less sensitive sample.
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