Constructing Bacillus thuringiensis strain that co-expresses Cry2Aa and chitinase
Constructing Bacillus thuringiensis strain that co-expresses Cry2Aa and chitinase
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共表达Cry2Aa和几丁质酶的苏云金芽孢杆菌菌株构建
DOI：
10.1007/s10529-013-1171-0
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发表时间：
2013-03
影响因子：
2.7
通讯作者：
Xia, Liqiu
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ding, Xuezhi;Hu, Xiaofeng;Yang, Qi;Xia, Liqiu
三重重组技术与质粒 pHT315 一起使用来产生 pHTEC，这是一种携带来自苏云金芽孢杆菌亚种的几丁质酶和cry2Aa 基因的构建体。库斯塔基4.0718。用 pHTEC 转化野生型苏云金芽孢杆菌菌株 HD73 和晶体菌株 Cry-B，回收了在细胞沉淀中以立方晶体形式表达 Cry2Aa 和可溶性几丁质酶蛋白的重组菌株。与携带 pHT315 载体的 HD73 (pHT315) 相比，HD73 (pHTEC) 对棉铃虫幼虫的毒性增加了七倍。通过比较 RecE/RecT 和 Redα/Redβ 介导的重组效率并使用单链 DNA 作为底物，优化了三重重组方案。
A triple recombineering technique was used with plasmid pHT315 to produce pHTEC, a construct carrying chitinase and cry2Aa genes from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki 4.0718. Transformation of wild-type B. thuringiensis strain HD73 and the acrystalliferous strain Cry-B with pHTEC resulted in the recovery of recombinant strains that expressed Cry2Aa as cubic crystals in the cell pellet and soluble chitinase protein. The toxicity of HD73 (pHTEC) against Helicoverpa armigera larvae increased sevenfold when compared with HD73 (pHT315) harboring pHT315 vector. The triple recombineering protocol was optimized by comparing recombination efficacy mediated by RecE/RecT and Redα/Redβ and by using single-strand DNA as substrate.
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