Biologically active fluorescent derivatives of spinach calmodulin that report calmodulin target protein binding.
Biologically active fluorescent derivatives of spinach calmodulin that report calmodulin target protein binding.
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菠菜钙调蛋白的生物活性荧光衍生物，可报告钙调蛋白靶蛋白的结合。
DOI：
10.1021/bi00403a023
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发表时间：
1988
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Johnson,JD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mills,JS;Walsh,MP;Nemcek,K;Johnson,JD
1987年9月28日摘要：菠菜钙调素（CaM）已被标记在半胱氨酸-26与巯基选择性探针2-（4-马来酰亚胺苯胺基）萘-6-磺酸（MIANS），以产生MIANS-CaM。用荧光增强法研究了MIANS-CaM与CaM结合蛋白的相互作用。MIANS-CaM与平滑肌肌球蛋白轻链激酶结合，Kd为9 nM，导致荧光增强4.6倍。Caldesmon以250 nM的Kd结合，导致2倍荧光增强。钙调神经磷酸酶（CaN）与MIANS-CaM的结合Kd< 5 nM，导致荧光增加80%。另一方面，结合钙调素拮抗剂药物prenamine和calmidazolium或有效的肽拮抗剂蜂毒肽没有改变MIANS荧光。MI-ANS-CaM与未标记的CaM一样有效地激活脑cGMP磷酸二酯酶和CaN。菠菜钙调素也标记有三个其他巯基试剂，6-丙烯酰基-2-（二甲氨基）萘，（2，5-二甲氧基-4-芪）马来酰亚胺，和罗丹明X马来酰亚胺。CaN与高荧光罗丹明X马来酰亚胺-CaM结合，Kd为1.4 nM，导致极化增加25%。MIANS-CaM和罗丹明X-CaM都被用来监测CaM和CaN之间相互作用的Ca 2+依赖性。在无Mg ~（2+）存在下，半最大结合发生在pCa 6.7-6.8，或在有3 mM Mg ~（2+）存在下，半最大结合发生在pCa 6.3。在这两种情况下，相互作用的依赖性是合作方面的Ca 2+（希尔系数为1.7-2.0）。这些荧光钙调素的使用应该允许准确监测钙调素与其靶蛋白的相互作用，也许他们在细胞内的定位。
Revised Manuscript Received September 28, 1987 abstract: Spinach calmodulin (CaM) has been labeled at cysteine-26 with the sulfhydryl-selective probe 2-(4-maleimidoanilino) naphthalene-6-sulfonic acid (MIANS) to produce MIANS-CaM. The interaction of MIANS-CaM with CaM binding proteins was studied by fluorescence enhancement accompanying the protein-protein interactions. MIANS-CaM bound to smooth muscle myosin light-chain kinase with a Kd of 9 nM, causing a 4.6-fold fluorescence enhancement. Caldesmon bound with a Kd of 250 nM, causing a 2-fold fluorescence enhancement. Calcineurin (CaN) boundto MIANS-CaM with a Kd< 5 nM, causing an 80% increase in fluorescence. On the other hand, binding of the CaM antagonist drugs prenylamine and calmidazolium or the potent peptide antagonist melittin did not alter MIANS fluorescence. MI-ANS-CaM activated brain cGMP phosphodiesterase and CaN as effectively as unlabeled CaM. Spinach CaM was also labeled with three other sulfhydryl reagents, 6-acryloyl-2-(dimethylamino) naphthalene,(2, 5-dimethoxy-4-stilbenyl) maleimide, and rhodamine X maleimide. CaN bound to the highly fluorescent rhodamine X maleimidyl-CaM with a Kd of 1.4 nM, causing a 25% increase in polarization. Both MIANS-CaM and rhodamine X-CaM were used to monitor the Ca2+ dependence of the interaction between CaM and CaN. Half-maximal binding occurredat pCa 6.7-6.8 in the absence of Mg2+, or at pCa 6.3 in the presence of 3 mM Mg2+. In both cases, the dependence of the interaction was cooperative with respect to Ca2+(Hill coefficients of 1.7-2.0). Use of these fluorescent CaMs should allow accurate monitoring of CaM interactions with its target proteinsand perhaps their localization within the cell.
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钙调蛋白结合与 3:5 cAMP 依赖性蛋白激酶催化亚基磷酸化平滑肌肌球蛋白激酶之间的关系。
DOI：
10.1016/s0021-9258(19)69586-4
发表时间：
1981
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Anne Conti;Adelstein
通讯作者：
Adelstein
血管平滑肌钙化蛋白。
DOI：
10.1016/s0021-9258(19)57507-x
发表时间：
1986
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Timothy Clark;Philip;Ngai;Cindy Sutherland;Ute Groschel;Michael P. Walshs
通讯作者：
Michael P. Walshs
鸡胗肌球蛋白轻链激酶天然形式的分离。
影响因子：
4.1
作者：
P. Ngai;C. A. Carruthers;M. Walsh
通讯作者：
M. Walsh
影响因子：
4.1
作者：
JOHNSON, JD;WITTENAUER, LA
通讯作者：
WITTENAUER, LA
影响因子：
2.9
作者：
SECRIST, JA;WEBER, G;BARRIO, JR
通讯作者：
BARRIO, JR