Application of Three-Dimensional Structured Illumination Microscopy in Cell Biology: Pitfalls and Practical Considerations
Application of Three-Dimensional Structured Illumination Microscopy in Cell Biology: Pitfalls and Practical Considerations
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三维结构照明显微镜在细胞生物学中的应用：陷阱和实际考虑
DOI：
10.1007/978-1-62703-983-3_8
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Schermelleh L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Smeets D;Neumann J;Schermelleh L
超分辨率荧光显微镜技术为以前所未有的空间分辨率解决细胞生物学问题铺平了道路。其中，三维结构照明显微镜（3D-SIM）达到了近八倍增加的体积分辨率相比，传统的衍射限制的方法，并允许标准荧光标记的固定或活样品的光学切片。由于其广泛的应用范围，3D-SIM可能成为细胞生物远场成像的关键方法，补充更专业的高分辨率技术，如单分子定位和冷冻电子显微镜。然而，为了充分探索3D-SIM的潜力，需要在样品的制备、仪器的校准、数据的后处理和有效定量测量的提取方面更加小心。在本章中，我们将讨论通常遇到的技术问题，并提供故障排除指南。
Super-resolution fluorescence microscopy techniques have paved the way to address cell biological questions with unprecedented spatial resolution. Of these, three-dimensional structured illumination microscopy (3D-SIM) reaches a nearly eightfold increased volumetric resolution compared to conventional diffraction-limited methods and allows multicolor optical sectioning of standard fluorescently labeled fixed or live samples. Owing to its broad application spectrum, 3D-SIM is likely to become a key method in cell biological far-field imaging, complementing more specialized higher-resolving techniques, such as single molecule localization and cryo-electron microscopy. To fully explore the potential of 3D-SIM, however, considerably greater care needs to be taken with regard to the preparation of the sample, calibration of the instrument, post-processing of the data, and extraction of valid quantitative measurements. In this chapter we discuss technical problems typically encountered and provide guidelines for troubleshooting.
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