A hypoxia-responsive element mediates a novel pathway of activation of the inducible nitric oxide synthase promoter.
A hypoxia-responsive element mediates a novel pathway of activation of the inducible nitric oxide synthase promoter.
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DOI：
10.1084/jem.182.6.1683
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发表时间：
1995-12-01
影响因子：
15.3
通讯作者：
Varesio, Luigi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Melillo, Giovanni;Musso, Tiziana;Sica, Antonio;Taylor, Lynn S.;Cox, George W.;Varesio, Luigi
吡啶甲酸是 L-色氨酸的分解代谢物，可激活 IFN-γ 处理的小鼠巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶基因 (iNOS) 的转录。我们对与 CAT 报告基因相连的 iNOS 基因 5' 侧翼区域进行了功能研究，以鉴定负责通过吡啶甲酸激活 iNOS 转录的顺式作用元件。瞬时转染试验表明，小鼠巨噬细胞系 ANA-1 中的全长 iNOS 启动子被 IFN-γ 和吡啶甲酸之间的协同相互作用激活。 iNOS启动子区域从-227删除或突变为-209，包含与缺氧反应增强子(iNOS-HRE)同源的序列，使吡啶甲酸诱导的CAT活性降低了70%以上，但LPS诱导的CAT活性没有降低。使用 tk 启动子-CAT 报告基因质粒的功能研究表明，iNOS-HRE 足以赋予吡啶甲酸诱导性，但不能通过 IFN-γ 或 LPS 诱导。电泳迁移率变动测定证实，吡啶甲酸单独诱导对 iNOS-HRE 的特异性结合活性。此外，我们发现缺氧可诱导 iNOS-HRE 活性，并且缺氧与 IFN-γ 结合可在瞬时转染测定中激活 iNOS 启动子并诱导 iNOS 转录和 mRNA 表达。这些数据证实 iNOS-HRE 是小鼠巨噬细胞中 iNOS 启动子活性的新型调节元件，并提供了 iNOS 是缺氧诱导基因的第一个证据。
Picolinic acid, a catabolite of L-tryptophan, activates the transcription of the inducible nitric oxide synthase gene (iNOS) in IFN- gamma-treated murine macrophages. We performed functional studies on the 5' flanking region of the iNOS gene linked to a CAT reporter gene to identify the cis-acting element(s) responsible for the activation of iNOS transcription by picolinic acid. Transient transfection assays showed that the full-length iNOS promoter in the murine macrophage cell line ANA-1 was activated by the synergistic interaction between IFN- gamma and picolinic acid. Deletion or mutation of the iNOS promoter region from -227 to -209, containing a sequence homology to a hypoxia- responsive enhancer (iNOS-HRE), decreased picolinic acid- but not LPS- induced CAT activity by more than 70%. Functional studies using a tk promoter-CAT reporter gene plasmid demonstrated that the iNOS-HRE was sufficient to confer inducibility by picolinic acid but not by IFN- gamma or LPS. Electrophoretic mobility shift assays confirmed that picolinic acid alone induced a specific binding activity to the iNOS- HRE. Furthermore, we found that the iNOS-HRE activity was inducible by hypoxia and that hypoxia in combination with IFN-gamma activated the iNOS promoter in transient transfection assays and induced iNOS transcription and mRNA expression. These data establish that the iNOS- HRE is a novel regulatory element of the iNOS promoter activity in murine macrophages and provide the first evidence that iNOS is a hypoxia-inducible gene.
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影响因子：
64.5
作者：
LOWENSTEIN, CJ;SNYDER, SH
通讯作者：
SNYDER, SH
DOI：
10.1073/pnas.91.14.6496
发表时间：
1994-07-05
影响因子：
11.1
作者：
FIRTH, JD;EBERT, BL;RATCLIFFE, PJ
通讯作者：
RATCLIFFE, PJ
影响因子：
4.8
作者：
HEYES, MP;SAITO, K;VICKERS, JH
通讯作者：
VICKERS, JH
DOI：
10.1084/jem.180.3.977
发表时间：
1994-09-01
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Martin E;Nathan C;Xie QW
通讯作者：
Xie QW
DOI：
10.1084/jem.178.2.749
发表时间：
1993-08-01
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
McCartney-Francis N;Allen JB;Mizel DE;Albina JE;Xie QW;Nathan CF;Wahl SM
通讯作者：
Wahl SM