An alternative mechanism of clathrin-coated pit closure revealed by ion conductance microscopy.
An alternative mechanism of clathrin-coated pit closure revealed by ion conductance microscopy.
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DOI：
10.1083/jcb.201109130
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发表时间：
2012-05-14
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Korchev YE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shevchuk AI;Novak P;Taylor M;Diakonov IA;Ziyadeh-Isleem A;Bitoun M;Guicheney P;Lab MJ;Gorelik J;Merrifield CJ;Klenerman D;Korchev YE
同时在活细胞中的离子电导和共聚焦显微镜揭示了一种新形式的不对称网格蛋白包被的小坑关闭。网格蛋白介导的内吞作用过程中发生的结构变化，目前的知识主要是基于电子显微镜图像的固定制剂和纯化蛋白质的X射线晶体学数据。在本文中，我们描述了一个网格蛋白包被的坑在活细胞中的动力学研究，使用离子电导显微镜直接成像坑形状的变化，结合同步共聚焦显微镜，以遵循分子特异性荧光。我们发现，70%的凹坑关闭与形成的突起，生长在一侧的凹坑，覆盖整个凹坑，然后消失与凹坑相关的网格蛋白增强的绿色荧光蛋白（EGFP）和肌动蛋白结合蛋白-EGFP（Abp 1-EGFP）的荧光。这与常规闭合凹坑形成对比，常规闭合凹坑闭合并从平坦膜片上切割，并且缺乏伴随的Abp 1-EGFP荧光。这两种类型的坑被认为是动力蛋白-2依赖的切断。这种技术现在能够在功能分子特异性荧光和结构信息之间建立直接的空间和时间相关性，以跟踪细胞表面的关键生物过程。
Simultaneous ion conductance and confocal microscopy in live cells reveal a new form of asymmetric clathrin-coated pit closure. Current knowledge of the structural changes taking place during clathrin-mediated endocytosis is largely based on electron microscopy images of fixed preparations and x-ray crystallography data of purified proteins. In this paper, we describe a study of clathrin-coated pit dynamics in living cells using ion conductance microscopy to directly image the changes in pit shape, combined with simultaneous confocal microscopy to follow molecule-specific fluorescence. We find that 70% of pits closed with the formation of a protrusion that grew on one side of the pit, covered the entire pit, and then disappeared together with pit-associated clathrin–enhanced green fluorescent protein (EGFP) and actin-binding protein–EGFP (Abp1-EGFP) fluorescence. This was in contrast to conventionally closing pits that closed and cleaved from flat membrane sheets and lacked accompanying Abp1-EGFP fluorescence. Scission of both types of pits was found to be dynamin-2 dependent. This technique now enables direct spatial and temporal correlation between functional molecule-specific fluorescence and structural information to follow key biological processes at cell surfaces.
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影响因子：
4.8
作者：
Keyel, PA;Watkins, SC;Traub, LM
通讯作者：
Traub, LM
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9.8
作者：
Loerke D;Mettlen M;Yarar D;Jaqaman K;Jaqaman H;Danuser G;Schmid SL
通讯作者：
Schmid SL
影响因子：
48
作者：
Novak, Pavel;Li, Chao;Shevchuk, Andrew I.;Stepanyan, Ruben;Caldwell, Matthew;Hughes, Simon;Smart, Trevor G.;Gorelik, Julia;Ostanin, Victor P.;Lab, Max J.;Moss, Guy W. J.;Frolenkov, Gregory I.;Klenerman, David;Korchev, Yuri E.
通讯作者：
Korchev, Yuri E.
DOI：
10.1083/jcb.84.3.560
发表时间：
1980-03
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Heuser J
通讯作者：
Heuser J
影响因子：
11.8
作者：
Macia, Eric;Ehrlich, Marcelo;Kirchhausen, Tomas
通讯作者：
Kirchhausen, Tomas