Accelerated RNA detection using tandem CRISPR nucleases.
Accelerated RNA detection using tandem CRISPR nucleases.
复制标题
DOI：
10.1038/s41589-021-00842-2
复制
发表时间：
2021-09
影响因子：
14.8
通讯作者：
Doudna, Jennifer A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu, Tina Y.;Knott, Gavin J.;Smock, Dylan C. J.;Desmarais, John J.;Son, Sungmin;Bhuiya, Abdul;Jakhanwal, Shrutee;Prywes, Noam;Agrawal, Shreeya;Derby, Maria Diaz de Leon;Switz, Neil A.;Armstrong, Maxim;Harris, Andrew R.;Charles, Emeric J.;Thornton, Brittney W.;Fozouni, Parinaz;Shu, Jeffrey;Stephens, Stephanie, I;Kumar, G. Renuka;Zhao, Chunyu;Mok, Amanda;Iavarone, Anthony T.;Escajeda, Arturo M.;McIntosh, Roger;Kim, Shin E.;Dugan, Eli J.;Pollard, Katherine S.;Tan, Ming X.;Ott, Melanie;Fletcher, Daniel A.;Lareau, Liana F.;Hsu, Patrick D.;Savage, David F.;Doudna, Jennifer A.
RNA的直接、无扩增检测具有通过实现对人类或环境样品的简单现场分析来改变分子诊断的潜力。CRISPR-Cas核酸酶提供可编程的RNA引导的RNA识别，触发荧光报告分子的切割和释放，但长反应时间阻碍了应用于即时检测时的灵敏度和速度。在这里，我们表明，不相关的CRISPR核酸酶可以串联部署，以提供直接的RNA传感和快速的信号产生，从而能够在20分钟内稳健地检测约30个RNA拷贝/微升。将RNA引导的Cas 13和Csm 6与化学稳定的激活剂相结合，可以使用紧凑的成像系统检测从鼻咽样本中提取的SARS-CoV-2 RNA，其在微流控芯片中的qRT-PCR衍生Ct值高达33。这种快速集成核酸酶检测串联（FIND-IT）方法能够以简单的形式直接检测RNA，适用于即时感染诊断以及广泛的其他诊断或研究应用。
Direct, amplification-free detection of RNA has the potential to transform molecular diagnostics by enabling simple on-site analysis of human or environmental samples. CRISPR-Cas nucleases offer programmable RNA-guided recognition of RNA that triggers cleavage and release of a fluorescent reporter molecule, but long reaction times hamper sensitivity and speed when applied to point-of-care testing. Here we show that unrelated CRISPR nucleases can be deployed in tandem to provide both direct RNA sensing and rapid signal generation, thus enabling robust detection of ~30 RNA copies/microliter in 20 minutes. Combining RNA-guided Cas13 and Csm6 with a chemically stabilized activator creates a one-step assay that can detect SARS-CoV-2 RNA extracted from nasopharyngeal samples with qRT-PCR-derived Ct values up to 33 in microfluidic chips, using a compact imaging system. This Fast Integrated Nuclease Detection In Tandem (FIND-IT) approach enables direct RNA detection in a simple format that is amenable to point-of-care infection diagnosis, as well as to a wide range of other diagnostic or research applications.
登录
查看更多内容
CRISPR-C2C2的两种不同的RNase活性启用了指导RNA处理和RNA检测。
影响因子：
64.8
作者：
East-Seletsky A;O'Connell MR;Knight SC;Burstein D;Cate JH;Tjian R;Doudna JA
通讯作者：
Doudna JA
影响因子：
64.8
作者：
Athukoralage JS;Rouillon C;Graham S;Grüschow S;White MF
通讯作者：
White MF
影响因子：
64.8
作者：
Ackerman, Cheri M.;Myhrvold, Cameron;Sabeti, Pardis C.
通讯作者：
Sabeti, Pardis C.
影响因子：
16.6
作者：
Liu, Tina Y.;Liu, Jun-Jie;Doudna, Jennifer A.
通讯作者：
Doudna, Jennifer A.
影响因子：
16
作者：
Lau, Rebecca K.;Ye, Qiaozhen;Corbett, Kevin D.
通讯作者：
Corbett, Kevin D.