Visualization and targeted disruption of protein interactions in living cells.
Visualization and targeted disruption of protein interactions in living cells.
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DOI：
10.1038/ncomms3660
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发表时间：
2013
影响因子：
16.6
通讯作者：
Cardoso, M. Cristina
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Herce, Henry D.;Deng, Wen;Helma, Jonas;Leonhardt, Heinrich;Cardoso, M. Cristina
蛋白质-蛋白质相互作用是活细胞中所有过程的基础，但这些相互作用的大多数研究依赖于体外生化测定。在这里，我们提出了一个简单而通用的荧光三杂交（F3 H）策略，以可视化和靶向蛋白质-蛋白质相互作用。高亲和力纳米抗体将感兴趣的GFP融合蛋白锚定在限定的细胞结构处，并且在这些位点处测量红色标记的相互作用蛋白的富集。通过这种方法，我们可视化活细胞中的p53-HDM 2相互作用，并直接监测Nutlin 3对这种相互作用的破坏，Nutlin 3是一种开发用于增强癌症治疗中p53活性的药物。我们进一步使用这种方法来开发一种细胞可渗透的载体，该载体释放一种高度特异性的肽，破坏p53和HDM 2的相互作用。这种基于纳米抗体的捕获测定的多个锚位点的可用性和简单的光学读数使得能够在几乎任何细胞类型和物种中对蛋白质-蛋白质相互作用进行系统和通用的分析。 筛选蛋白质-蛋白质相互作用和破坏它们的药物通常使用体外分析，无法捕获细胞内部的复杂性。通过将蛋白质固定到不同的细胞位置，Herce等人展示了一种荧光三杂交方法来探测细胞环境中的这种相互作用。
Protein–protein interactions are the basis of all processes in living cells, but most studies of these interactions rely on biochemical in vitro assays. Here we present a simple and versatile fluorescent-three-hybrid (F3H) strategy to visualize and target protein–protein interactions. A high-affinity nanobody anchors a GFP-fusion protein of interest at a defined cellular structure and the enrichment of red-labelled interacting proteins is measured at these sites. With this approach, we visualize the p53–HDM2 interaction in living cells and directly monitor the disruption of this interaction by Nutlin 3, a drug developed to boost p53 activity in cancer therapy. We further use this approach to develop a cell-permeable vector that releases a highly specific peptide disrupting the p53 and HDM2 interaction. The availability of multiple anchor sites and the simple optical readout of this nanobody-based capture assay enable systematic and versatile analyses of protein–protein interactions in practically any cell type and species. Screens for protein–protein interactions and for drugs that disrupt them typically use in vitro assays which fail to capture the complexity of the cell’s interior. By fixing proteins to distinct cellular locations, Herce et al. demonstrate a fluorescent-three-hybrid approach to probe such interactions in their cellular contexts.
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影响因子：
4.8
作者：
Hu, Baoli;Gilkes, Daniele M.;Chen, Jiandong
通讯作者：
Chen, Jiandong
影响因子：
48
作者：
Rothbauer, Ulrich;Zolghadr, Kourosh;Leonhardt, Heinrich
通讯作者：
Leonhardt, Heinrich
影响因子：
64.5
作者：
Bond, GL;Hu, WW;Levine, AJ
通讯作者：
Levine, AJ
影响因子：
64.8
作者：
OLINER, JD;KINZLER, KW;VOGELSTEIN, B
通讯作者：
VOGELSTEIN, B
DOI：
10.1074/jbc.m805550200
发表时间：
2009-02-06
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Ter-Avetisyan G;Tünnemann G;Nowak D;Nitschke M;Herrmann A;Drab M;Cardoso MC
通讯作者：
Cardoso MC