Expression of TAT recombinant Oct4, Sox2, Lin28, and Nanog proteins from baculovirus-infected Sf9 insect cells.
Expression of TAT recombinant Oct4, Sox2, Lin28, and Nanog proteins from baculovirus-infected Sf9 insect cells.
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DOI：
10.1016/j.gene.2014.11.061
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发表时间：
2015-02-10
期刊：
影响因子：
3.5
通讯作者：
Bishop, Colin E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pan, Chuanying;Jia, Wenchao;Lu, Baisong;Bishop, Colin E.
自首次报道从小鼠成纤维细胞中产生诱导多能干细胞（iPSCs）以来，体细胞重编程引起了极大的兴趣，但将病毒转基因整合到基因组中不太可能被接受。考虑到这些安全因素，我们开发了一种从适应悬液的Sf9昆虫细胞中无病毒瞬时基因表达的方法。在这里，我们使用杆状病毒表达载体系统（BEVS）在Sf9细胞中表达转录反激活因子（TAT）融合蛋白Sox2、Oct4、Lin28和Nanog。TAT-Sox2、TAT-Oct4、TAT-Lin28和TAT-Nanog融合蛋白的分子量分别为36 kD、40 kD、24 kD和36 kD。进一步的研究表明，大多数重组蛋白留在Sf9昆虫细胞的细胞核中，因此无法进行纯化和细胞重编程。一旦这个问题得到解决，从杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中表达的蛋白质很可能成为细胞重编程的选择方法。
Somatic cell reprogramming has generated enormous interest, following the first report of generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from mouse fibroblasts, but the integration of viral transgenes into the genome is unlikely to be accepted. Given these safety considerations, a method for virus-free transient gene expression from suspension-adapted Sf9 insect cells was developed. Here, we expressed transactivator of transcription (TAT)-fused proteins, Sox2, Oct4, Lin28, and Nanog in Sf9 cells using the baculovirus expression vector system (BEVS). The molecular weights of the TAT-Sox2, TAT-Oct4, TAT-Lin28, and TAT-Nanog fusion proteins were 36 kD, 40 kD, 24 kD, and 36 kD, respectively. Further investigation indicated that most of the recombinant proteins remained in the nuclei of the Sf9 insect cells and were therefore unavailable for purification and cellular reprogramming. Once this problem has been solved, it seems likely that protein expressed from baculovirus-infected Sf9 insect cells will be the method of choice for cellular reprogramming.
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影响因子：
13.8
作者：
Bieniossek C;Imasaki T;Takagi Y;Berger I
通讯作者：
Berger I
DOI：
10.1126/science.1162494
发表时间：
2008-11-07
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Stadtfeld M;Nagaya M;Utikal J;Weir G;Hochedlinger K
通讯作者：
Hochedlinger K
影响因子：
3
作者：
Nemes, Csilla;Varga, Eszter;Dinnyes, Andras
通讯作者：
Dinnyes, Andras
DOI：
10.1126/science.1172482
发表时间：
2009-05-08
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Yu J;Hu K;Smuga-Otto K;Tian S;Stewart R;Slukvin II;Thomson JA
通讯作者：
Thomson JA
影响因子：
23.9
作者：
Kim D;Kim CH;Moon JI;Chung YG;Chang MY;Han BS;Ko S;Yang E;Cha KY;Lanza R;Kim KS
通讯作者：
Kim KS