Characterization of cDNA encoding mouse DNA repair protein O6-methylguanine-DNA methyltransferase and high-level expression of the wild-type and mutant proteins in Escherichia coli.
Characterization of cDNA encoding mouse DNA repair protein O6-methylguanine-DNA methyltransferase and high-level expression of the wild-type and mutant proteins in Escherichia coli.
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编码小鼠 DNA 修复蛋白 O6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶的 cDNA 的表征以及野生型和突变蛋白在大肠杆菌中的高水平表达。
DOI：
10.1021/bi00122a001
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发表时间：
1992
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Mitra,S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shiota,S;vonWronski,MA;Tano,K;Bigner,DD;Brent,TP;Mitra,S
田纳西大学橡树岭研究生院生物医学科学和生物学部，橡树岭国家实验室，橡树岭，田纳西州 37831，药理学系，圣裘德儿童研究医院，孟菲斯，田纳西州 38101，杜克大学医学中心病理学系，达勒姆，北卡罗来纳州 27710 1991 年 8 月 7 日收稿；修订稿于1991年11月22日收到 摘要：从Xgtl 1文库中克隆了编码C 1 -甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的小鼠cDNA克隆，该酶负责修复DNA中的诱变C 1 -烷基鸟嘌呤。根据cDNA的开放阅读框，小鼠蛋白含有211个氨基酸，分子量为22 kDa。小鼠蛋白的大小和预测的 N 端序列已通过实验得到证实。推导的小鼠MGMT的氨基酸序列与人MGMT的氨基酸序列有70％的同源性。 Cysteine-149 被证明是小鼠蛋白质中唯一的烷基受体残基，这证实了基于不同 MGMT 保守序列的预测。小鼠 MGMT 蛋白可被一些人 MGMT 特异性单克隆抗体识别。利用定点诱变在基于 T7 启动子的载体中重做小鼠 cDNA，以在大肠杆菌中过度表达天然修复蛋白。小鼠蛋白质在位置 56-59 处具有四肽序列 Pro-Glu-Gly-Val，而人类蛋白质中则没有。删除该四肽或用丙氨酸替换 169 号缬氨酸均不会影响突变蛋白的活性。
University of Tennessee—Oak Ridge Graduate School of Biomedical Sciences and Biology Division, Oak Ridge National Laboratory, Oak Ridge, Tennessee 37831, Department of Pharmacology, St. Jude Children's Research Hospital, Memphis, Tennessee 38101, and Department of Pathology, Duke University Medical Center, Durham, North Carolina 27710 Received August 7, 1991; Revised Manuscript Received November 22, 1991 abstract: A mouse cDNA clone encoding C^-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT), responsible for repair of mutagenic C^-alkylguanine in DNA, was cloned from a Xgtl 1 library. On the basis of an open reading frame in cDNA, the mouse protein contains 211 amino acids with a molecular mass of 22 kDa. The size andthe predicted N-terminal sequence of the mouse protein were confirmed experimentally. The deduced amino acid sequence of the mouse MGMT is 70% homologous tothat of the human MGMT. Cysteine-149 was shown to be the onlyalkyl acceptor residue in the mouse protein, in confirmation of the prediction based on conserved sequences of different MGMTs. Mouse MGMT protein is recognized by some monoclonal antibodies specific for human MGMT. Site-directed mutagenesis was utilized to redone the mouse cDNA in a T7 promoter-based vector for overexpression of the nativerepair protein in Escherichia coli. The mouse protein has a tetrapeptide sequence, Pro-Glu-Gly-Val at positions 56-59, absent in the human protein. Neither deletion of this tetrapeptide nor substitution of valine-169 with alanine affected the activity of the mutant proteins.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(18)61070-1
发表时间：
1987-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
P. Matsudaira
通讯作者：
P. Matsudaira
影响因子：
14.9
作者：
HEMSLEY, A;ARNHEIM, N;GALAS, DJ
通讯作者：
GALAS, DJ
球蛋白信使 RNA 在异源无细胞系统中的翻译。
影响因子：
64.8
作者：
M. Mathews;M. Osborn;J. Lingrel
通讯作者：
J. Lingrel
枯草芽孢杆菌甲基转移酶基因在大肠杆菌 ada- 细胞中的克隆和表达。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
Mutation research
影响因子：
--
作者：
Ken ichi Kodama;Y. Nakabeppu;Mutsuo Sekiguchi
通讯作者：
Mutsuo Sekiguchi
影响因子：
2.4
作者：
PEGG, AE
通讯作者：
PEGG, AE