Scalable, two-stage, autoinduction of recombinant protein expression in E. coli utilizing phosphate depletion.
Scalable, two-stage, autoinduction of recombinant protein expression in E. coli utilizing phosphate depletion.
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DOI：
10.1002/bit.27440
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发表时间：
2020-09
影响因子：
3.8
通讯作者：
Lynch, Michael D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Menacho-Melgar, Romel;Ye, Zhixia;Moreb, Eirik A.;Yang, Tian;Efromson, John P.;Decker, John S.;Wang, Ruixin;Lynch, Michael D.
我们报告了大肠杆菌中重组蛋白的可扩展生产，依赖于严格控制的自诱导，由稳定期的磷酸盐耗尽引发。该方法依赖于工程菌株和质粒，能够提高跨规模的蛋白质表达。使用这种方法的表达水平已经达到高达总细胞蛋白的55%。该方法在仪器化补料分批发酵中的初始使用使细胞密度达到约30 gCDW/L，蛋白质滴度高达8.1 ± 0.7 g/L（约270 mg/gCDW）。该工艺还适用于优化的自诱导培养基，能够以20 μ l（384孔板）、100 μ l（96孔板）、20 ml和100 ml的培养体积进行常规批量生产。在分批培养中，细胞密度通常达到约5 - 7 gCDW/L，提供高于2 g/L的蛋白滴度。该方法已经用一组不同的异源蛋白进行了验证，并且通常用于从高通量筛选到补料分批发酵的常规蛋白表达的简易优化。
We report the scalable production of recombinant proteins in Escherichia coli, reliant on tightly controlled autoinduction, triggered by phosphate depletion in the stationary phase. The method, reliant on engineered strains and plasmids, enables improved protein expression across scales. Expression levels using this approach have reached as high as 55% of the total cellular protein. The initial use of the method in instrumented fed-batch fermentations enables cell densities of ~30 gCDW/L and protein titers up to 8.1 ± 0.7 g/L (~270 mg/gCDW). The process has also been adapted to an optimized autoinduction media, enabling routine batch production at culture volumes of 20 μl (384-well plates), 100 μl (96-well plates), 20 ml, and 100 ml. In batch cultures, cell densities routinely reach ~5–7 gCDW/L, offering protein titers above 2 g/L. The methodology has been validated with a set of diverse heterologous proteins and is of general use for the facile optimization of routine protein expression from high throughput screens to fed-batch fermentation.
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DOI：
10.1107/s0907444906031337
发表时间：
2006-10-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
Berrow, Nick S.;Buessow, K.;Busso, Didier
通讯作者：
Busso, Didier
影响因子：
6.4
作者：
Glazyrina J;Materne EM;Dreher T;Storm D;Junne S;Adams T;Greller G;Neubauer P
通讯作者：
Neubauer P
DOI：
10.1128/genomea.01038-14
发表时间：
2014-10-16
期刊：
Genome announcements
影响因子：
--
作者：
Grenier F;Matteau D;Baby V;Rodrigue S
通讯作者：
Rodrigue S
影响因子：
4.4
作者：
Ahn, Jungoh;Hong, Jiyeon;Lee, Hongweon
通讯作者：
Lee, Hongweon
影响因子：
2.7
作者：
Kerovuo, J;von Weymarn, N;Miasnikov, A
通讯作者：
Miasnikov, A