Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations.
Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations.
复制标题
DOI：
10.1038/nbt.1641
复制
发表时间：
2010-06
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
血液中单个蛋白质分子的检测可以帮助识别许多新的诊断蛋白质标记物。我们报告了一种同时检测数百到数千个单个蛋白质分子的方法，这种方法可以检测非常低浓度的蛋白质。蛋白质被捕获在微小的珠子上并用酶标记，这样每个珠子要么有一个酶标记的蛋白质，要么没有。通过在50飞升的反应室阵列中分离这些小珠，可以通过荧光成像检测单个蛋白质。在100 μL（~10−19 M）范围内，单分子可检测到~10 ~ 20种酶。基于酶标记的单分子酶联免疫吸附试验（digital ELISA）能够在浓度（<10 - 15 M）远低于传统ELISA的情况下检测血清中临床相关蛋白。数字ELISA在根治性前列腺切除术患者的所有检测血清中检测到前列腺特异性抗原，低至14 fg/mL （0.4 fM）。
The detection of single protein molecules in blood could help identify many new diagnostic protein markers. We report an approach for detecting hundreds to thousands of individual protein molecules simultaneously that enables the detection of very low concentrations of proteins. Proteins are captured on microscopic beads and labeled with an enzyme, such that each bead has either one or zero enzyme-labeled proteins. By isolating these beads in arrays of 50-femtoliter reaction chambers, single proteins can be detected by fluorescence imaging. By singulating molecules in these arrays, ~10–20 enzymes can be detected in 100 μL (~10−19 M). Single molecule enzyme-linked immunosorbent assays (digital ELISA) based on singulation of enzyme labels enabled the detection of clinically-relevant proteins in serum at concentrations (<10−15 M) much lower than conventional ELISA. Digital ELISA detected prostate specific antigen in all tested sera from patients who had undergone radical prostatectomy, down to 14 fg/mL (0.4 fM).
登录
查看更多内容
影响因子：
7.4
作者：
Tan, WH;Yeung, ES
通讯作者：
Yeung, ES
影响因子：
8.6
作者：
Pantano, P;Walt, DR
通讯作者：
Walt, DR
影响因子：
7.4
作者：
Tessler, Lee A.;Reifenberger, Jeffrey G.;Mitra, Robi D.
通讯作者：
Mitra, Robi D.
影响因子：
9.3
作者：
Todd, John;Freese, Bob;Goix, Philippe
通讯作者：
Goix, Philippe
影响因子：
10.8
作者：
Rissin, DM;Walt, DR
通讯作者：
Walt, DR