A motif in the C-terminal domain of ϕC31 integrase controls the directionality of recombination
A motif in the C-terminal domain of ϕC31 integrase controls the directionality of recombination
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ÏC31 整合酶 C 端结构域中的基序控制重组的方向性
DOI：
--
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发表时间：
2008
影响因子：
14.9
通讯作者：
Margaret C. M. Smith
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Paul A. Rowley;Matthew C. A. Smith;Ellen Younger;Margaret C. M. Smith
噬菌体ϕC31编码一种整合酶，作用于噬菌体和宿主的附着点attP和attB，形成位于attL和attR两侧的整合原噬菌体。在没有辅助因子的情况下，ϕC31整合酶不能催化attL x AttR重组来切除原噬菌体。为了了解定向的机制，对在切除过程中活跃的突变整合酶进行了表征。一种高活性整合酶Int E449K在保持重组attP x attB能力的同时，获得了催化attL x attR、attL x attL和attR x attR重组的能力。该突变体的催化缺陷衍生物Int S12A，E449K在Int S12A仅与attP/attB形成络合物的条件下，能与attP/attB、attL/AttR、attL/attL和AttR/AttR形成稳定的络合物。对Int E449K-attL/AttR突触事件的进一步分析表明，两种预测的突触结构中的一种具有不同的attL/AttR位点取向。几个导致高活性的氨基酸替换，包括E449K，被定位在预测的C-末端结构域的螺旋螺旋基序的一个面上。这项工作表明，ϕC31整合酶C-末端结构域的一个基序可能通过在蛋白质-蛋白质相互作用中直接作用，在整合和切除过程中控制突触界面的形成。
Bacteriophage ϕC31 encodes an integrase, which acts on the phage and host attachment sites, attP and attB, to form an integrated prophage flanked by attL and attR. In the absence of accessory factors, ϕC31 integrase cannot catalyse attL x attR recombination to excise the prophage. To understand the mechanism of directionality, mutant integrases were characterized that were active in excision. A hyperactive integrase, Int E449K, gained the ability to catalyse attL x attR, attL x attL and attR x attR recombination whilst retaining the ability to recombine attP x attB. A catalytically defective derivative of this mutant, Int S12A, E449K, could form stable complexes with attP/attB, attL/attR, attL/attL and attR/attR under conditions where Int S12A only complexed with attP/attB. Further analysis of the Int E449K-attL/attR synaptic events revealed a preference for one of the two predicted synapse structures with different orientations of the attL/attR sites. Several amino acid substitutions conferring hyperactivity, including E449K, were localized to one face of a predicted coiled-coil motif in the C-terminal domain. This work shows that a motif in the C-terminal domain of ϕC31 integrase controls the formation of the synaptic interface in both integration and excision, possibly through a direct role in protein–protein interactions.
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DOI：
10.1128/9781555817954
发表时间：
2002
期刊：
--
影响因子：
--
作者：
N. Craig;M. Chandler;M. Gellert;A. Lambowitz;P. Rice;S. Sandmeyer
通讯作者：
N. Craig;M. Chandler;M. Gellert;A. Lambowitz;P. Rice;S. Sandmeyer
影响因子：
14.9
作者：
Lewis, JA;Hatfull, GF
通讯作者：
Hatfull, GF
影响因子：
16
作者：
Ghosh, P;Kim, AI;Hatfull, GF
通讯作者：
Hatfull, GF
DOI：
10.1073/pnas.090527097
发表时间：
2000-05-23
影响因子：
11.1
作者：
Groth, AC;Olivares, EC;Calos, MP
通讯作者：
Calos, MP
影响因子：
5.6
作者：
Ghosh, P;Pannunzio, NR;Hatfull, GF
通讯作者：
Hatfull, GF