Unique reporter-based sensor platforms to monitor signalling in cells.
Unique reporter-based sensor platforms to monitor signalling in cells.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0050521
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Pitt AR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jiwaji M;Daly R;Gibriel A;Barkess G;McLean P;Yang J;Pansare K;Cumming S;McLauchlan A;Kamola PJ;Bhutta MS;West AG;West KL;Kolch W;Girolami MA;Pitt AR
近年来，在系统生物学工具的开发方面取得了很大进展，以研究mRNA和蛋白质的水平及其在细胞内的相互作用。然而，很少有多重方法可用于直接在转录因子水平上研究细胞信号传导。在这里，我们描述了一个敏感的，基于质粒的RNA报告的方法来研究转录因子在哺乳动物细胞中的激活，并应用这种技术来分析60个转录因子的平行。该方法使用两个强大且易于访问的检测平台;用于定量分析的定量实时PCR和用于并行、更高通量分析的DNA微阵列。我们用10种诱导剂测试检测平台的特异性，并独立验证转录因子激活。我们报告了一种方法，在哺乳动物细胞中的转录因子激活的多重研究是直接的，而不是理论上的限制，可用的记者的数量。
In recent years much progress has been made in the development of tools for systems biology to study the levels of mRNA and protein, and their interactions within cells. However, few multiplexed methodologies are available to study cell signalling directly at the transcription factor level. Here we describe a sensitive, plasmid-based RNA reporter methodology to study transcription factor activation in mammalian cells, and apply this technology to profiling 60 transcription factors in parallel. The methodology uses two robust and easily accessible detection platforms; quantitative real-time PCR for quantitative analysis and DNA microarrays for parallel, higher throughput analysis. We test the specificity of the detection platforms with ten inducers and independently validate the transcription factor activation. We report a methodology for the multiplexed study of transcription factor activation in mammalian cells that is direct and not theoretically limited by the number of available reporters.
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影响因子：
--
作者：
Jiwaji M;Daly R;Pansare K;McLean P;Yang J;Kolch W;Pitt AR
通讯作者：
Pitt AR
影响因子：
7
作者：
Heid, CA;Stevens, J;Williams, PM
通讯作者：
Williams, PM
影响因子：
48
作者：
Romanov, Sergei;Medvedev, Alexander;Makarov, Sergei
通讯作者：
Makarov, Sergei
DOI：
10.1073/pnas.90.7.2965
发表时间：
1993-04-01
影响因子：
11.1
作者：
PRESTERA, T;HOLTZCLAW, WD;TALALAY, P
通讯作者：
TALALAY, P
影响因子：
5.3
作者：
Krappmann, D;Patke, A;Scheidereit, C
通讯作者：
Scheidereit, C