Carbohydrate analysis of glycoprotein hormones.
Carbohydrate analysis of glycoprotein hormones.
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糖蛋白激素的碳水化合物分析。
作者：
G. Bousfield;V. L. Baker;R. Gotschall;V. Butnev
完整的糖蛋白激素，它们的亚基，和从个别糖基化位点分离的寡糖的碳水化合物组成分析可以使用高pH阴离子交换色谱结合脉冲安培检测来完成。在Dionex CarboPAC PA 1柱上，在16 mM NaOH中，通过等度色谱法从相同的水解产物中分析中性糖和氨基糖。在温和水解条件下，在相同柱上，在150 mM NaOH中的150 mM乙酸钠中定量唾液酸。在Dionex AS 4A色谱柱上，在1.8 mM Na（2）CO（3）/1.7 mM NaHCO（3）中进行离子色谱;柱后，在线阴离子微膜抑制;电导检测可用于定量硫酸盐，这是垂体糖蛋白激素寡糖的常见组分。在从单个糖基化位点消除寡糖之前和之后的质谱分析可以提供平均寡糖质量的估计值，这有助于解释寡糖组成数据。通过肽N-聚糖酶（PNGase）消化和超滤纯化释放后，可使用与组成分析相同的设备通过高分辨率寡糖图谱技术对寡糖进行表征。通过改变PNGase消化条件或底物，寡糖图谱可应用于整个激素、单个亚基或单个糖基化位点。通过SDS-PAGE容易地监测PNGase的寡糖释放。位点特异性去糖基化可以通过氨基酸序列分析来确认。对于寡糖的常规分离，在还原末端添加2-氨基苯甲酰胺有助于检测;然而，寡糖保留时间会改变。组成分析也受到影响，因为2-氨基苯甲酰胺修饰的GlcNAc峰与岩藻糖峰重叠。
Complete carbohydrate composition analysis of glycoprotein hormones, their subunits, and oligosaccharides isolated from individual glycosylation sites can be accomplished using high-pH anion-exchange chromatography combined with pulsed amperometric detection. Neutral and amino sugars are analyzed from the same hydrolyzate by isocratic chromatography on a Dionex CarboPAC PA1 column in 16 mM NaOH. Sialic acid is quantified following mild hydrolysis conditions on the same column in 150 mM sodium acetate in 150 mM NaOH. Ion chromatography on a Dionex AS4A column in 1.8 mM Na(2)CO(3)/1.7 mM NaHCO(3); postcolumn, in-line anion micromembrane suppression; and conductivity detection can be used to quantify sulfate, a common component of pituitary glycoprotein hormone oligosaccharides. Mass spectrometric analysis before and after elimination of oligosaccharides from a single glycosylation site can provide an estimate of the average oligosaccharide mass, which facilitates interpretation of oligosaccharide composition data. Following release by peptide N-glycanase (PNGase) digestion and purification by ultrafiltration, oligosaccharides can be characterized by a high-resolution oligosaccharide mapping technique using the same equipment employed for composition analysis. Oligosaccharide mapping can be applied to the entire hormone, individual subunits, or individual glycosylation sites by varying PNGase digestion conditions or substrates. Oligosaccharide release by PNGase is readily monitored by SDS-PAGE. Site-specific deglycosylation can be confirmed by amino acid sequence analysis. For routine isolation of oligosaccharides, addition of 2-aminobenzamide at the reducing terminus facilitates detection; however, the oligosaccharide retention times are altered. Composition analysis is also affected as the 2-aminobenzamide-modified GlcNAc peak overlaps the fucose peak.
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单个基因编码马黄体生成素和绒毛膜促性腺激素的β亚基。
DOI：
10.1210/mend.6.6.1379674
发表时间：
1992
期刊：
Molecular endocrinology (Baltimore, Md.)
影响因子：
--
作者：
Sherman,GB;Wolfe,MW;Farmerie,TA;Clay,CM;Threadgill,DS;Sharp,DC;Nilson,JH
通讯作者：
Nilson,JH
绒毛膜促性腺激素 N 连接寡糖在信号转导中的位点特异性。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Matzuk,MM;Keene,JL;Boime,I
通讯作者：
Boime,I
使用离子色谱法分析糖蛋白和其他生物化合物中的硫酸盐和磷酸盐。
DOI：
10.1016/s0021-9673(01)96511-2
发表时间：
1987
期刊：
Journal of chromatography
影响因子：
--
作者：
Ward,DN;Wen,T;Bousfield,GR
通讯作者：
Bousfield,GR
影响因子：
2.9
作者：
HARDY, MR;TOWNSEND, RR;LEE, YC
通讯作者：
LEE, YC
高分子量马绒毛膜促性腺激素的 O-连接寡糖对其黄体生成素和卵泡刺激素受体结合活性的负面影响。
DOI：
10.1210/endo.137.6.8641207
发表时间：
1996
期刊：
Endocrinology.
影响因子：
--
作者：
Butnev,VY;Gotschall,RR;Baker,VL;Moore,WT;Bousfield,GR
通讯作者：
Bousfield,GR