Identification of a plant viral RNA genome in the nucleus.
Identification of a plant viral RNA genome in the nucleus.
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核中植物病毒RNA基因组中的鉴定。
DOI：
10.1371/journal.pone.0048736
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Wong SM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gao R;Liu P;Wong SM
病毒含有 DNA 或 RNA 作为基因组。 DNA病毒在细胞核内复制，而大多数RNA病毒，尤其是(+)-正义单链RNA，在细胞质内复制并存在。我们提出了一个新的想法，与(+)-正义单链RNA病毒仅存在于细胞质中的普遍观念相反。在这项研究中，我们质疑植物 RNA 病毒（非逆转录病毒）的基因组是否存在于受感染细胞的细胞核中？荧光原位杂交显示，在受感染细胞的细胞核中检测到木槿褪绿环斑病毒 (HCRSV) RNA。使用抗组蛋白 3 和抗磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的蛋白质印迹显示，分别从模拟和 HCRSV 感染的红麻 (Hibiscus cannabilis L.) 叶子中高度纯化细胞核。 p23 和 HCRSV 外壳蛋白 (CP) 编码区均从分离的细胞核中提取的总 RNA 中扩增。细胞核中的病毒 RNA 可用于生成病毒 microRNA (vir-miRNA)，因为使用 vir-miRNA 预测数据库从 HCRSV 预测了 5 个假定的 vir-miRNA。使用 TaqMan® 茎环实时 PCR 以及使用 DIG 末端标记探针在 HCRSV 感染的红麻叶子中通过 Northern 印迹检测 vir-miRNA (hcrsv-miR-H1-5p)。最后，在 HCRSV 的 p23 中发现了一种新的核定位信号（NLS）。 NLS 与输入蛋白 α 相互作用，促进病毒 RNA 基因组进入细胞核。我们证明了细胞核内存在 (+)-正义单链病毒 RNA。
Viruses contain either DNA or RNA as genomes. DNA viruses replicate within nucleus, while most RNA viruses, especially (+)-sense single-stranded RNA, replicate and are present within cytoplasm. We proposed a new thought that is contrary to the common notion that (+)-sense single-stranded RNA viruses are present only in the cytoplasm. In this study, we question whether the genome of a plant RNA virus (non-retroviral) is present in the nucleus of infected cells? Hibiscus chlorotic ringspot virus (HCRSV) RNA was detected in the nucleus of infected cells, as shown by fluorescent in situ hybridization. Western blot using anti-histone 3 and anti-phosphoenolpyruvate carboxylase showed that nuclei were highly purified from mock and HCRSV-infected kenaf (Hibiscus cannabilis L.) leaves, respectively. The p23 and HCRSV coat protein (CP) coding regions were both amplified from total RNA extracted from isolated nuclei. Viral RNA in the nucleus may be used to generate viral microRNAs (vir-miRNAs), as five putative vir-miRNAs were predicted from HCRSV using the vir-miRNAs prediction database. The vir-miRNA (hcrsv-miR-H1-5p) was detected using TaqMan® stem-loop real-time PCR, and by northern blot using DIG-end labeled probe in HCRSV-infected kenaf leaves. Finally, a novel nuclear localization signal (NLS) was discovered in p23 of HCRSV. The NLS interacts with importin α and facilitates viral RNA genome to enter nucleus. We demonstrate the presence of a (+)-sense single-stranded viral RNA within nucleus.
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影响因子：
14.9
作者：
Chen C;Ridzon DA;Broomer AJ;Zhou Z;Lee DH;Nguyen JT;Barbisin M;Xu NL;Mahuvakar VR;Andersen MR;Lao KQ;Livak KJ;Guegler KJ
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Guegler KJ
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作者：
Cullen, Bryan R.
通讯作者：
Cullen, Bryan R.
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GOLDFARB, DS;GARIEPY, J;KORNBERG, RD
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KORNBERG, RD
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