Integrating chemical mutagenesis and whole-genome sequencing as a platform for forward and reverse genetic analysis of Chlamydia.
Integrating chemical mutagenesis and whole-genome sequencing as a platform for forward and reverse genetic analysis of Chlamydia.
复制标题
DOI：
10.1016/j.chom.2015.03.014
复制
发表时间：
2015-05-13
影响因子：
30.3
通讯作者：
Bastidas RJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kokes M;Dunn JD;Granek JA;Nguyen BD;Barker JR;Valdivia RH;Bastidas RJ
转座子插入或等位基因交换使基因失活是探索基因功能的一种有效方法。不幸的是，许多微生物，包括衣原体，不适合常规的分子遗传操作。在这里，我们描述了一个化学诱导的沙眼衣原体突变文库，其中所有的突变都已经通过全基因组测序进行了鉴定，为反向遗传应用提供了一个平台。对收集中可能的功能丧失突变的分析发现，这种专性细胞内病原体的中央代谢特性具有可塑性。我们还描述了在正向遗传筛查中使用该文库，该文库确定INAC是一种细菌因子，它结合宿主ARF和14-3-3蛋白来调节F-肌动蛋白组装和病理性空泡周围的高尔基体重新分布。这项工作为衣原体的反向和正向遗传方法提供了一个强大的平台，应该成为社区的宝贵资源。
Gene inactivation by transposon insertion or allelic exchange is a powerful approach to probe gene function. Unfortunately, many microbes, including Chlamydia, are not amenable to routine molecular genetic manipulations. Here we describe an arrayed library of chemically-induced mutants of the genetically-intransigent pathogen Chlamydia trachomatis, in which all mutations have been identified by whole genome sequencing, providing a platform for reverse genetic applications. An analysis of possible loss-of-function mutations in the collection uncovered plasticity in the central metabolic properties of this obligate intracellular pathogen. We also describe the use of the library in a forward genetic screen that identified InaC as a bacterial factor that binds host ARF and 14-3-3 proteins to modulate F-actin assembly and Golgi redistribution around the pathogenic vacuole. This work provides a robust platform for reverse and forward genetic approaches in Chlamydia and should serve as a valuable resource to the community.
登录
查看更多内容
影响因子：
6.7
作者：
Chen YS;Bastidas RJ;Saka HA;Carpenter VK;Richards KL;Plano GV;Valdivia RH
通讯作者：
Valdivia RH
影响因子：
6.7
作者：
Derré I;Swiss R;Agaisse H
通讯作者：
Agaisse H
影响因子：
14.9
作者：
Bromberg Y;Rost B
通讯作者：
Rost B
DOI：
10.1073/pnas.92.11.4877
发表时间：
1995-05-23
影响因子：
11.1
作者：
HACKSTADT, T;SCIDMORE, MA;ROCKEY, DD
通讯作者：
ROCKEY, DD
影响因子：
6.7
作者：
Elwell CA;Jiang S;Kim JH;Lee A;Wittmann T;Hanada K;Melancon P;Engel JN
通讯作者：
Engel JN