Reverse-phase high-performance liquid chromatography of hydrophobic proteins and fragments thereof.
Reverse-phase high-performance liquid chromatography of hydrophobic proteins and fragments thereof.
复制标题
疏水蛋白及其片段的反相高效液相色谱。
DOI：
10.1016/0003-2697(83)90140-9
复制
发表时间：
1983
影响因子：
2.9
通讯作者：
Crabb,JW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tarr,GE;Crabb,JW
通过使用三元溶剂，可以增强细胞色素 P-450 和牛视紫红质（两种膜内蛋白以及源自 P-450 LM2 的大肽）的反相高效液相色谱 (HPLC) 分辨率和回收率。令人惊讶的是，与单独使用任一溶剂相比，当在流动相中使用乙腈和丙醇的混合物时，大多数测试材料在梯度中洗脱得较晚。在测试的支持物中，疏水性细胞色素 P-450 LM4 的最佳回收率出现在保留性较低的 CN 键合相上。建议使用两种用于多肽 HPLC 的替代溶剂： (1) 0.02–0.1 m 六氟丙酮/NH3，pH 7.2，适用于高酸性肽； (2) 6 m 甲酸/0.13 m 三甲胺，pH 1.5，对比 4 m 甲酸/0.09 m 三甲胺的丙醇溶液，用于相对不溶的肽。甲酸和肽之间的异常副反应会导致 HPLC 峰变宽、保留增加和分辨率降低。这些有害作用被认为部分是由于丝氨酸和苏氨酸残基的甲酰酯化造成的，并且似乎可以通过氨基乙醇处理来逆转。
Reverse-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) resolution and recovery of cytochrome P-450 and bovine rhodopsin, both integral membrane proteins, and large peptides derived from P-450 LM2were enhanced by utilizing ternary solvents. Surprisingly, most test materials eluted later in the gradient when using mixtures of acetonitrile and propanol in the mobile phase compared to using either solvent alone. Of the supports tested, the best recovery of hydrophobic cytochrome P-450 LM4was experienced on the less retentive CN-bonded phase. Two alternate solvents for HPLC of polypeptides are proposed: (1) 0.02–0.1 m hexafluoroacetone/NH3, pH 7.2 for highly acidic peptides; and (2) 6 m formic acid/0.13 m trimethylamine, pH 1.5, vs 4 m formic acid/0.09 m trimethylamine in propanol for relatively insoluble peptides. Anomalous side reactions between formic acid and peptides can cause HPLC peak broadening, increased retention, and decreased resolution. These deleterious effects are thought to be due in part to formyl esterification of serine and threonine residues and appear to be reversible by aminoethanol treatment.
登录
查看更多内容
DOI：
--
发表时间：
1980
期刊：
影响因子：
--
作者：
Z. Deyl
通讯作者：
Z. Deyl
复杂肽混合物反相高效液相色谱的分析和制备图谱
DOI：
--
发表时间：
1981
期刊：
影响因子：
--
作者：
P. Böhlen;G. Kleeman
通讯作者：
G. Kleeman
通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳表征牛视杆外节的蛋白质。
DOI：
--
发表时间：
1977
期刊：
Biochemical and Biophysical Research Communications - BBRC
影响因子：
--
作者：
F. Siebert;H. Schmid;R. Mull
通讯作者：
R. Mull
来自两种形式的细胞色素 P-450 的类似肽的氨基酸序列。
DOI：
--
发表时间：
1981
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Ozols,J;Heinemann,FS;Johnson,EF
通讯作者：
Johnson,EF
采用等度高效液相色谱法快速分离氨基酸苯硫基乙内酰脲。
影响因子：
2.9
作者：
Tarr,GE
通讯作者：
Tarr,GE