Effective production of oligomeric membrane proteins by EarlyBac-insect cell system.
Effective production of oligomeric membrane proteins by EarlyBac-insect cell system.
复制标题
DOI：
10.1016/bs.mie.2020.12.019
复制
发表时间：
2021
影响因子：
--
通讯作者：
Michalski K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Furukawa H;Simorowski N;Michalski K
尽管过去二十年来膜蛋白生产方法取得了重大进展，但仍然存在具有挑战性的蛋白质复合物，这些蛋白质复合物在技术上难以通过传统重组表达方法产生。这些蛋白质中的大量是来自真核物种的多聚体膜蛋白，其需要通过宿主细胞的严格质量控制机制以进行适当的折叠和复杂的组装。在这里，我们描述了开发程序，以提高生产效率的多寡聚体膜蛋白复合物在昆虫细胞和重组杆状病毒，其中包括筛选启动子，增强子，和非翻译区的表达水平，使用钙稳态调节剂（CALHM）和N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）蛋白作为例子。我们证明了我们的昆虫细胞表达策略在多同源CALHM蛋白和多异源NMDAR的表达中是有效的。
Despite major advances in methodologies for membrane protein production over the last two decades, there remain challenging protein complexes that are technically difficult to yield by conventional recombinant expression methods. A large number of these proteins are multimeric membrane proteins from eukaryotic species, which are required to pass through stringent quality control mechanisms of host cells for proper folding and complex assembly. Here, we describe the development procedure to improve the production efficiency of multi-oligomeric membrane protein complexes in insect cells and recombinant baculovirus, which involves screening of promoters, enhancers, and untranslated regions for expression levels, using calcium homeostasis modulator (CALHM) and N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR) proteins as examples. We demonstrate that our insect cell expression strategy is effective in expression of both multi-homomeric CALHM proteins and multi-heteromeric NMDARs.
登录
查看更多内容
影响因子：
16.2
作者：
Jespersen A;Tajima N;Fernandez-Cuervo G;Garnier-Amblard EC;Furukawa H
通讯作者：
Furukawa H
影响因子：
16.2
作者：
Inanobe, A;Furukawa, H;Gouaux, E
通讯作者：
Gouaux, E
DOI：
10.1073/pnas.84.24.8874
发表时间：
1987-12-01
影响因子：
11.1
作者：
OPRIAN, DD;MOLDAY, RS;KHORANA, HG
通讯作者：
KHORANA, HG
影响因子：
16.6
作者：
Regan, Michael C.;Zhu, Zongjian;Furukawa, Hiro
通讯作者：
Furukawa, Hiro
影响因子：
2.9
作者：
GIMPL, G;KLEIN, U;FAHRENHOLZ, F
通讯作者：
FAHRENHOLZ, F