Rapid method for determining the rate of DNA synthesis and cellular proliferation.
Rapid method for determining the rate of DNA synthesis and cellular proliferation.
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快速测定 DNA 合成和细胞增殖速率的方法。
DOI：
10.1006/abio.1999.4427
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发表时间：
2000
影响因子：
2.9
通讯作者：
Yudkoff,M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nissim,I;Starr,SE;Sullivan,KE;Campbell,DE;Douglas,SD;Daikhin,Y;Yudkoff,M
建立了一种测定细胞增殖过程中DNA合成的新方法。该方法基于[U-13 C6]葡萄糖代谢为脱氧核糖（DR），然后将[U-13 C5]DR掺入新合成的DNA中。使提取的细胞DNA经受HCl水解（在100°C下2小时），其将DR转化为乙酰丙酸。用气相色谱-质谱法测定了乙酰丙酸三甲基甲硅烷基衍生物中DR的13 C富集。该方法快速、灵敏。该方法能准确测定13 C富集度低于1at.%的样品在低至4 ng DNA中过量。我们用这种方法测定了体外细胞增殖率和一定量DNA中DR的水平。目前的方法具有显着的优势，在以前描述的方法，并克服了几个困难，在体内和体外的DNA合成的测定。
A new method has been developed for determination of DNA synthesis during cell proliferation. The method is based on the metabolism of [U-13C6]glucose to deoxyribose (DR) and then incorporation of [U-13C5]DR into newly synthesized DNA. Extracted cellular DNA is subjected to HCl hydrolysis (2 h at 100°C), which converts DR into levulinic acid. The13C enrichment in DR is determined in the trimethylsilyl derivative of levulinate using gas chromatography–mass spectrometry. The method is rapid and sensitive. It can precisely determine13C enrichment below 1 at.% excess in as little as 4 ng DNA. We have used this method to determine the rate of cell proliferation in vitro and the level of DR in a given amount of DNA. The current approach has significant advantages over previously described methods and overcomes several difficulties related to the determination of DNA synthesis both in vivo and in vitro.
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DOI：
--
发表时间：
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通讯作者：
N. A. Sörensen
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Lewis,S;Yudkoff,M
通讯作者：
Yudkoff,M
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DOI：
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P. Reeds