Imaging RNA polymerase III transcription using a photostable RNA-fluorophore complex.
Imaging RNA polymerase III transcription using a photostable RNA-fluorophore complex.
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DOI：
10.1038/nchembio.2477
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发表时间：
2017-11
影响因子：
14.8
通讯作者：
Jaffrey SR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Song W;Filonov GS;Kim H;Hirsch M;Li X;Moon JD;Jaffrey SR
活细胞中转录率的定量测量对于揭示转录调控机制非常重要。这对于测量RNA聚合酶III （Pol III）的活性尤其具有挑战性，Pol III转录促进生长的小RNA。为了解决这个问题，我们开发了玉米，一个遗传编码的荧光RNA报告适于定量细胞中的RNA转录。玉米结合并诱导3,5-二氟-4-羟基苄基-咪唑啉酮-2-肟的荧光，类似于红色荧光蛋白（RFP）中的荧光团。值得注意的是，玉米具有很高的光稳定性，可以对mtor依赖的Pol III转录进行定量荧光成像。与放线菌素D不同，我们发现mTOR抑制剂在单个细胞中导致异质转录抑制。玉米标记的Pol III转录水平的定量成像揭示了mTOR抑制引起的不同的Pol III转录“轨迹”。总之，这些研究提供了一种通过直接成像含有光稳定rna -荧光团复合物的Pol III转录物来定量测量Pol III转录的方法。
Quantitative measurement of transcription rates in live cells is important for revealing mechanisms of transcriptional regulation. This is particularly challenging for measuring the activity of RNA polymerase III (Pol III), which transcribes growth-promoting small RNAs. To address this, we developed Corn, a genetically encoded fluorescent RNA reporter suitable for quantifying RNA transcription in cells. Corn binds and induces fluorescence of 3,5-difluoro-4-hydroxybenzylidene-imidazolinone-2-oxime, which resembles the fluorophore found in red fluorescent protein (RFP). Notably, Corn shows high photostability, enabling quantitative fluorescence imaging of mTOR-dependent Pol III transcription. Unlike actinomycin D, we found that mTOR inhibitors resulted in heterogeneous transcription suppression in individual cells. Quantitative imaging of Corn-tagged Pol III transcript levels revealed distinct Pol III transcription “trajectories” elicited by mTOR inhibition. Together, these studies provide an approach for quantitative measurements of Pol III transcription by direct imaging of Pol III transcripts containing a photostable RNA-fluorophore complex.
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DOI：
10.1126/science.1207339
发表时间：
2011-07-29
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Paige JS;Wu KY;Jaffrey SR
通讯作者：
Jaffrey SR
影响因子：
46.9
作者：
Nagai, T;Ibata, K;Miyawaki, A
通讯作者：
Miyawaki, A
影响因子：
5.3
作者：
SISODIA, SS;SOLLNERWEBB, B;CLEVELAND, DW
通讯作者：
CLEVELAND, DW
含有 G-四链体的 RNA 会激活类 GFP 荧光团中的荧光。
影响因子：
14.8
作者：
Huang, Hao;Suslov, Nikolai B.;Li, Nan-Sheng;Shelke, Sandip A.;Evans, Molly E.;Koldobskaya, Yelena;Rice, Phoebe A.;Piccirilli, Joseph A.
通讯作者：
Piccirilli, Joseph A.
影响因子：
4.8
作者：
Shor, Boris;Wu, Jiang;Yu, Ker
通讯作者：
Yu, Ker