Super-resolution microscopy using standard fluorescent proteins in intact cells under cryo-conditions.
Super-resolution microscopy using standard fluorescent proteins in intact cells under cryo-conditions.
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DOI：
10.1021/nl501870p
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发表时间：
2014-07-09
期刊：
影响因子：
10.8
通讯作者：
Grünewald K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kaufmann R;Schellenberger P;Seiradake E;Dobbie IM;Jones EY;Davis I;Hagen C;Grünewald K
我们介绍了一种超分辨率技术的荧光冷冻显微镜的基础上，在低温（81 K）的完整的哺乳动物细胞中的标准基因编码的荧光标记蛋白的光开关。由于缺乏低温浸没物镜所施加的限制，荧光低温显微镜对生物样本的当前应用仅实现400-500 nm之间的分辨率。我们证明了在液氮温度下mEGFP和mVenus的可逆光漂白的单分子特性适用于单分子定位显微镜的基本概念。这使我们能够对玻璃化生物样品进行超分辨率成像，并首次以125 nm的结构分辨率（平均单分子定位精度140 nm）可视化未扰动的快速冷冻细胞中的结构，对应于3-5倍的分辨率提高。
We introduce a super-resolution technique for fluorescence cryo-microscopy based on photoswitching of standard genetically encoded fluorescent marker proteins in intact mammalian cells at low temperature (81 K). Given the limit imposed by the lack of cryo-immersion objectives, current applications of fluorescence cryo-microscopy to biological specimens achieve resolutions between 400–500 nm only. We demonstrate that the single molecule characteristics of reversible photobleaching of mEGFP and mVenus at liquid nitrogen temperature are suitable for the basic concept of single molecule localization microscopy. This enabled us to perform super-resolution imaging of vitrified biological samples and to visualize structures in unperturbed fast frozen cells for the first time with a structural resolution of ∼125 nm (average single molecule localization accuracy ∼40 nm), corresponding to a 3–5 fold resolution improvement.
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影响因子：
48
作者：
Dempsey, Graham T.;Vaughan, Joshua C.;Chen, Kok Hao;Bates, Mark;Zhuang, Xiaowei
通讯作者：
Zhuang, Xiaowei
影响因子：
48
作者：
Biteen, Julie S.;Thompson, Michael A.;Tselentis, Nicole K.;Bowman, Grant R.;Shapiro, Lucy;Moerner, W. E.
通讯作者：
Moerner, W. E.
影响因子：
2.2
作者：
Schellenberger, Pascale;Kaufmann, Rainer;Siebert, C. Alistair;Hagen, Christoph;Wodrich, Harald;Gruenewald, Kay
通讯作者：
Gruenewald, Kay
影响因子：
56.9
作者：
Schermelleh, Lothar;Carlton, Peter M.;Sedat, John W.
通讯作者：
Sedat, John W.
影响因子：
2
作者：
Bleck, C. K. E.;Merz, A.;Griffiths, G.
通讯作者：
Griffiths, G.