A toolbox of anti-mouse and anti-rabbit IgG secondary nanobodies.
A toolbox of anti-mouse and anti-rabbit IgG secondary nanobodies.
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DOI：
10.1083/jcb.201709115
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发表时间：
2018-03-05
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Görlich D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pleiner T;Bates M;Görlich D
Pleiner、Bates 和 Görlich 介绍了抗小鼠和抗兔 IgG 纳米抗体，这些纳米抗体可以在大肠杆菌中产生，并与报告基因融合或进行荧光标记，以创建明亮且特异的检测试剂，与传统的多克隆二抗相比具有独特的优势。多克隆抗免疫球蛋白 G（抗 IgG）二抗是许多分子生物学技术和诊断测试的重要工具。然而，他们的动物性生产是一个主要的道德问题。在这里，我们介绍了一种可持续的替代方案，即针对所有小鼠 IgG 亚类和兔 IgG 的纳米抗体。它们可以在大肠杆菌中大规模生产，因此可以淘汰在动物中生产二抗。它们的重组性质允许与亲和标签或报告酶融合，以及用于荧光团偶联的有效马来酰亚胺化学。我们证明了它们在蛋白质印迹中的卓越性能，无论是过氧化物酶连接形式还是荧光团连接形式。它们具有多种荧光团的位点特异性标记，为共焦和超分辨率显微镜创造了明亮的成像试剂，其标记位移比传统二抗小得多。它们还可以实现更简单、更快速的免疫染色方案，并允许使用来自同一物种和同一类别的初级 IgG 进行多目标定位。
Pleiner, Bates, and Görlich introduce anti–mouse and anti–rabbit IgG nanobodies that can be produced in E. coli and fused to reporters or labeled fluorescently to create bright and specific detection reagents with unique advantages over conventional polyclonal secondary antibodies. Polyclonal anti–immunoglobulin G (anti-IgG) secondary antibodies are essential tools for many molecular biology techniques and diagnostic tests. Their animal-based production is, however, a major ethical problem. Here, we introduce a sustainable alternative, namely nanobodies against all mouse IgG subclasses and rabbit IgG. They can be produced at large scale in Escherichia coli and could thus make secondary antibody production in animals obsolete. Their recombinant nature allows fusion with affinity tags or reporter enzymes as well as efficient maleimide chemistry for fluorophore coupling. We demonstrate their superior performance in Western blotting, in both peroxidase- and fluorophore-linked form. Their site-specific labeling with multiple fluorophores creates bright imaging reagents for confocal and superresolution microscopy with much smaller label displacement than traditional secondary antibodies. They also enable simpler and faster immunostaining protocols, and allow multitarget localization with primary IgGs from the same species and of the same class.
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DOI：
10.1083/jcb.201409074
发表时间：
2015-06-08
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Helma J;Cardoso MC;Muyldermans S;Leonhardt H
通讯作者：
Leonhardt H
影响因子：
5
作者：
Krainer, Florian W.;Glieder, Anton
通讯作者：
Glieder, Anton
影响因子：
56.9
作者：
Bates, Mark;Huang, Bo;Zhuang, Xiaowei
通讯作者：
Zhuang, Xiaowei
影响因子：
56.9
作者：
Balzarotti, Francisco;Eilers, Yvan;Hell, Stefan W.
通讯作者：
Hell, Stefan W.
影响因子：
48
作者：
Lam, Stephanie S.;Martell, Jeffrey D.;Ting, Alice Y.
通讯作者：
Ting, Alice Y.