Roles of E4orf6 and VA I RNA in Adenovirus-Mediated Stimulation of Human Parvovirus B19 DNA Replication and Structural Gene Expression
Roles of E4orf6 and VA I RNA in Adenovirus-Mediated Stimulation of Human Parvovirus B19 DNA Replication and Structural Gene Expression
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E4orf6 和 VA I RNA 在腺病毒介导的人细小病毒 B19 DNA 复制和结构基因表达刺激中的作用
作者：
K. Winter;Kristina von Kietzell;R. Heilbronn;Tanja Pozzuto;H. Fechner;S. Weger
尽管人细小病毒B19(B19V)对红系祖细胞的嗜性很窄，但最近研究表明，在存在早期腺病毒功能的情况下，人细小病毒B19(B19V)可以在293细胞中复制并形成感染性后代病毒，这可以通过感染5型腺病毒或通过添加编码E2A、E4orf6和VA RNA功能的pHelper质粒来实现。在本研究中，我们剖析了这些功能对B19V基因组复制和结构蛋白VP1和VP2表达的个体影响。我们发现，在成分表达的E1A和E1B存在的情况下，E4orf6单独能够促进B19V的DNA复制，导致VP表达水平的增加。E4orf6的刺激作用需要BC盒基序的完整性，该基序针对细胞蛋白，如P53和Mre11 DNA修复复合体，通过与E1B形成E3泛素连接酶复合体来降解蛋白酶体。Va RNA也强烈诱导VP的表达，但与E4orf6不同的是，Va RNA以复制不依赖的方式诱导VP表达。这种刺激可能完全归因于VA I RNA转录本，并不涉及B19V p6启动子水平上的主要激活作用，但VA I RNA介导的通过蛋白激酶R功能失活来刺激翻译所需的核苷酸残基是明确的。这些数据表明，调控B19V复制的细胞途径可能与控制辅助依赖性细小病毒(腺相关病毒)的产生周期的途径非常相似。
ABSTRACT Despite its very narrow tropism for erythroid progenitor cells, human parvovirus B19 (B19V) has recently been shown to replicate and form infectious progeny virus in 293 cells in the presence of early adenoviral functions provided either by infection with adenovirus type 5 or by addition of the pHelper plasmid encoding the E2a, E4orf6, and VA RNA functions. In the present study we dissected the individual influence of these functions on B19V genome replication and expression of structural proteins VP1 and VP2. We show that, in the presence of the constitutively expressed E1A and E1B, E4orf6 alone is able to promote B19V DNA replication, resulting in a concomitant increase in VP expression levels. The stimulatory effects of E4orf6 require the integrity of the BC box motifs, which target cellular proteins such as p53 and the Mre11 DNA repair complex for proteosomal degradation through formation of an E3 ubiquitin ligase complex with E1B. VA RNA also strongly induces VP expression but, in contrast to E4orf6, in a replication-independent manner. This stimulation could be attributed exclusively to the VA I RNA transcript and does not involve major activating effects at the level of the B19V p6 promoter, but the nucleotide residues required for the well-defined pathway of VA I RNA mediated stimulation of translation through functional inactivation of protein kinase R. These data show that the cellular pathways regulating B19V replication may be very similar to those governing the productive cycle of the helper-dependent parvoviruses, the adeno-associated viruses.
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