Site-specific integration in CHO cells mediated by CRISPR/Cas9 and homology-directed DNA repair pathway.
Site-specific integration in CHO cells mediated by CRISPR/Cas9 and homology-directed DNA repair pathway.
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DOI：
10.1038/srep08572
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发表时间：
2015-02-25
影响因子：
4.6
通讯作者：
Kildegaard HF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lee JS;Kallehauge TB;Pedersen LE;Kildegaard HF
中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞是最广泛用于生产治疗性蛋白质的哺乳动物宿主。然而，重组 CHO 细胞系的开发因随机整合引起的不稳定和可变的转基因表达而受到阻碍。在这里，我们展示了使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑系统和包含感兴趣基因 (GOI) 和短同源臂的兼容供体质粒，将靶向基因有效整合到 CHO 细胞中的位点特异性基因座。通过简单的药物选择，该策略能够在 CHO 细胞中的指定位点精确插入 3.7 kb 基因表达盒，从而产生同质转基因表达。总而言之，此处显示的结果有助于为 GOI 靶向 CHO 细胞中的特定位点铺平道路，从而增加生成具有一致蛋白质生产的同基因细胞系的可能性。
Chinese hamster ovary (CHO) cells are the most widely used mammalian hosts for production of therapeutic proteins. However, development of recombinant CHO cell lines has been hampered by unstable and variable transgene expression caused by random integration. Here we demonstrate efficient targeted gene integration into site-specific loci in CHO cells using CRISPR/Cas9 genome editing system and compatible donor plasmid harboring a gene of interest (GOI) and short homology arms. This strategy has enabled precise insertion of a 3.7-kb gene expression cassette at defined loci in CHO cells following a simple drug-selection, resulting in homogeneous transgene expression. Taken together, the results displayed here can help pave the way for the targeting of GOI to specific loci in CHO cells, increasing the likelihood of generating isogenic cell lines with consistent protein production.
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通讯作者：
Jaenisch, Rudolf