Reversible inhibition of the second step of splicing suggests a possible role of zinc in the second step of splicing.
Reversible inhibition of the second step of splicing suggests a possible role of zinc in the second step of splicing.
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第二步剪接的可逆抑制表明锌在第二步剪接中可能发挥作用。
DOI：
10.1093/nar/gkf553
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发表时间：
2002
影响因子：
14.9
通讯作者：
G. Ast
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
N. Shomron;Hadar Malca;Ida Vig;G. Ast
蛋白质和 RNA 的多组分复合物组装在新合成的前 mRNA 上，形成剪接体。该复合物催化去除内含子和连接外显子所需的两步酯交换反应。迄今为止，仅发现了酵母第二步剪接所必需的六种蛋白质，并且已鉴定出它们的人类同源物。我们证明，在体外 mRNA 剪接反应中添加锌的选择性螯合剂 1,10-菲咯啉会导致剪接第二步的剂量依赖性抑制。这种抑制伴随着在剪接反应的第二步完成之前暂停的剪接体的积累。对第二步的抑制作用既不是由于 snRNA 降解，也不是由于与 mRNA 的直接结合，并且可以通过在反应开始时透析或添加锌（但不是其他二价金属）来逆转。这些发现表明，参与第二步剪接的假定的锌依赖性金属蛋白的活性受到影响。这项研究概述了一种使用外部试剂特异性可逆抑制第二步剪接的新方法，并提出了二价阳离子（最有可能是锌）在 mRNA 剪接第二步中的可能作用。
A multicomponent complex of proteins and RNA is assembled on the newly synthesized pre-mRNA to form the spliceosome. This complex catalyzes a two-step transesterification reaction required to remove the introns and ligate the exons. To date, only six proteins have been found necessary for the second step of splicing in yeast, and their human homologs have been identified. We demonstrate that the addition of the selective chelator of zinc, 1,10-phenanthroline, to an in vitro mRNA splicing reaction causes a dose-dependent inhibition of the second step of splicing. This inhibition is accompanied by the accumulation of spliceosomes paused before completion of step two of the splicing reaction. The inhibition effect on the second step is due neither to snRNA degradation nor to direct binding to the mRNA, and is reversible by dialysis or add-back of zinc, but not of other divalent metals, at the beginning of the reaction. These findings suggest that the activity of a putative zinc-dependent metalloprotein(s) involved in the second step of splicing is affected. This study outlines a new method for specific reversible inhibition of the second step of splicing using external reagents, and suggests a possible role of divalent cations in the second step of mRNA splicing, most likely zinc.
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前 mRNA 剪接的第二个催化步骤。
DOI：
--
发表时间：
1995
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--
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通讯作者：
Guthrie,C
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