Chemical visualization of an attractant peptide, LURE.
Chemical visualization of an attractant peptide, LURE.
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DOI：
10.1093/pcp/pcq191
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发表时间：
2011-01
影响因子：
4.9
通讯作者：
Higashiyama T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Goto H;Okuda S;Mizukami A;Mori H;Sasaki N;Kurihara D;Higashiyama T
蓝猪耳的花粉管引诱肽 LURE 是在体外吸引花粉管的扩散肽。在这里，我们报告了一种方法，通过将 LURE 肽与 Alexa Fluor 488 荧光染料缀合，可以直接可视化 LURE 肽，而不抑制其吸引活性。纯化并重折叠带有多组氨酸标签的重组 LURE2 后，其氨基基团被靶向与 Alexa Fluor 染料缀合。通过荧光和质谱分析证实了 LURE2 的标记。在我们使用明胶珠的体外测定中，Alexa Fluor 488 标记的 LURE2 似乎与未标记的 LURE2 具有相同的活性。使用标记的LURE2，检查LURE2分布的时空变化与活性之间的关系。当 LURE2 嵌入明胶珠中时，LURE2 会吸引花粉管，但在琼脂糖珠中则几乎不吸引花粉管。直接可视化表明这些条件之间的显着差异是 LURE2 保留在明胶珠中，这可能会延迟 LURE2 从珠中的扩散。 LURE 肽的直接可视化可能为研究 LURE 在花粉管吸引中的时空动力学开辟道路。
The pollen tube attractant peptide LUREs of Torenia fournieri are diffusible peptides that attract pollen tubes in vitro. Here, we report a method enabling the direct visualization of a LURE peptide without inhibiting its attraction activity by conjugating it with the Alexa Fluor 488 fluorescent dye. After purifying and refolding the recombinant LURE2 with a polyhistidine tag, its amino groups were targeted for conjugation with the Alexa Fluor dye. Labeling of LURE2 was confirmed by its fluorescence and mass spectrometry. In our in vitro assay using gelatin beads, Alexa Fluor 488-labeled LURE2 appeared to have the same activity as unlabeled LURE2. Using the labeled LURE2, the relationship between the spatiotemporal change of distribution and activity of LURE2 was examined. LURE2 attracted pollen tubes when embedded in gelatin beads, but hardly at all when in agarose beads. Direct visualization suggested that the significant difference between these conditions was the retention of LURE2 in the gelatin bead, which might delay diffusion of LURE2 from the bead. Direct visualization of LURE peptide may open the way to studying the spatiotemporal dynamics of LURE in pollen tube attraction.
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