Identification of RNase-resistant RNAs in Saccharomyces cerevisiae extracts: Separation from chromosomal DNA by selective precipitation.
Identification of RNase-resistant RNAs in Saccharomyces cerevisiae extracts: Separation from chromosomal DNA by selective precipitation.
复制标题
酿酒酵母提取物中 RNase 抗性 RNA 的鉴定：通过选择性沉淀从染色体 DNA 中分离。
DOI：
10.1016/j.ab.2015.09.017
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发表时间：
2016
影响因子：
2.9
通讯作者：
Maeder,Corina
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rodriguez,BlancaV;Malczewskyj,EricT;Cabiya,JoshuaM;Lewis,LKevin;Maeder,Corina
高质量的染色体DNA是许多生化和分子生物学技术的要求。为了分离细胞DNA，标准方案通常使用化学和物理方法相结合的方法来裂解细胞并将核酸从其他生物分子中分离出来。在用标准的化学方法从酿酒酵母中分离染色体DNA，然后用RNaseA处理以降解RNA之后，当用凝胶电泳法分析时，两条RNase抗性条带仍然存在。有趣的是，经核糖核酸酶处理后的大肠杆菌DNA制备物中没有出现这种抗性条带。为了去除抗性RNA，人们采用了几种酶、化学和物理方法，包括使用多种核糖核酸酶和酒精沉淀法、碱基水解法和层析法。这些实验导致了一种新的提取酿酒酵母染色体DNA的方法的发展。这种方法利用在醋酸钾/异丙醇混合物存在下选择性地沉淀DNA，并产生高产率的染色体DNA，而不会检测到污染的RNA。
High-quality chromosomal DNA is a requirement for many biochemical and molecular biological techniques. To isolate cellular DNA, standard protocols typically lyse cells and separate nucleic acids from other biological molecules using a combination of chemical and physical methods. After a standard chemical-based protocol to isolate chromosomal DNA fromSaccharomyces cerevisiaeand then treatment with RNase A to degrade RNA, two RNase-resistant bands persisted when analyzed using gel electrophoresis. Interestingly, such resistant bands did not appear in preparations ofEscherichia colibacterial DNA after RNase treatment. Several enzymatic, chemical, and physical methods were employed in an effort to remove the resistant RNAs, including use of multiple RNases and alcohol precipitation, base hydrolysis, and chromatographic methods. These experiments resulted in the development of a new method for isolation ofS. cerevisiaechromosomal DNA. This method utilizes selective precipitation of DNA in the presence of a potassium acetate/isopropanol mixture and produces high yields of chromosomal DNA without detectable contaminating RNAs.
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