ULtiMATE system for rapid assembly of customized TAL effectors.
ULtiMATE system for rapid assembly of customized TAL effectors.
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用于快速组装定制 TAL 效应器的 ULtiMATE 系统
DOI：
10.1371/journal.pone.0075649
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Wei W
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang J;Yuan P;Wen D;Sheng Y;Zhu S;Yu Y;Gao X;Wei W
工程化 TAL 效应核酸酶 (TALEN) 和基于 TALE 的构建体已成为真核基因组编辑的强大工具。尽管已经报道了许多方法，但以快速、精确和经济高效的方式组装基于设计者的 TALE 重复序列仍然是一个挑战。我们推出了 ULtiMATE（基于用户的 TAL 效应器结扎介导组装）系统，用于快速、准确地组装定制 TALE 构建体。该方法利用尿嘧啶特异性切除试剂 (USER) 在任何相邻 DNA 片段之间创建多个不同的粘性末端，以进行特异性连接。借助预组装的模板，多个 TALE DNA 结合域可以在数小时内以最少的手动操作按顺序高效组装。该系统已被证明可以产生用于有效基因敲除和 TALE 介导的基因特异性转录激活 (TALE-TA) 的功能性 TALEN。 ULtiMATE 系统易于操作和高效的特点使其不仅成为生物实验室的理想方法，而且非常适合大规模组装 TALEN 和任何其他基于 TALE 的结构。
Engineered TAL-effector nucleases (TALENs) and TALE-based constructs have become powerful tools for eukaryotic genome editing. Although many methods have been reported, it remains a challenge for the assembly of designer-based TALE repeats in a fast, precise and cost-effective manner. We present an ULtiMATE (USER-based Ligation Mediated Assembly of TAL Effector) system for speedy and accurate assembly of customized TALE constructs. This method takes advantage of uracil-specific excision reagent (USER) to create multiple distinct sticky ends between any neighboring DNA fragments for specific ligation. With pre-assembled templates, multiple TALE DNA-binding domains could be efficiently assembled in order within hours with minimal manual operation. This system has been demonstrated to produce both functional TALENs for effective gene knockout and TALE-mediated gene-specific transcription activation (TALE-TA). The feature of both ease-of-operation and high efficiency of ULtiMATE system makes it not only an ideal method for biologic labs, but also an approach well suited for large-scale assembly of TALENs and any other TALE-based constructions.
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影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1073/pnas.1019533108
发表时间：
2011-02-08
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
Zhu, Jian-Kang