Production and characterization of thirteen human type-I interferon-α subtypes.
Production and characterization of thirteen human type-I interferon-α subtypes.
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DOI：
10.1016/j.pep.2014.08.010
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发表时间：
2014-11
影响因子：
1.6
通讯作者：
Walter MR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kuruganti S;Accavitti-Loper MA;Walter MR
在大肠杆菌中表达了13种人干扰素α (IFNα)亚型，并利用枯草杆菌原域的n端亲和力标签纯化了这些亚型。IFNα亚型以可溶性形式表达，从细胞裂解物中纯化，或从包涵体中折叠纯化。两种方法产生的蛋白质的生物活性都等于或大于商业制备的IFNα制剂。利用IFNαs产生抗IFNα16抗体（mab - 1112），特异性中和IFNα16的生物活性，但不能中和其他12种IFNαs。利用单克隆抗体- 1112和先前生成的IFNAR1/IFNAR2-FChk异源二聚体，开发了一种测定未知样品中I型IFN总生物活性和IFNα16衍生生物活性的方法。
Thirteen human interferon-α (IFNα) subtypes were expressed in E. coli and purified using an N-terminal affinity tag from the prodomain of subtilisn. IFNα subtypes were expressed in soluble form and purified from cell lysates or refolded and purified from inclusion bodies. Proteins produced by either protocol exhibited biological activities equal to or greater than commercially prepared IFNα preparations. The IFNαs were used to produce an anti-IFNα16 antibody (MAb-1B12) that specifically neutralized the biological activity of IFNα16, but not the 12 other IFNαs. Using MAb-1B12, and a previously generated IFNAR1/IFNAR2-FChk heterodimer, an assay was developed to determine total type I IFN biological activity and IFNα16-derived biological activity in an unknown sample.
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