Expression and Purification of Site-Specifically Lysine-Acetylated and Natively-Folded Proteins for Biophysical Investigations.
Expression and Purification of Site-Specifically Lysine-Acetylated and Natively-Folded Proteins for Biophysical Investigations.
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用于生物物理研究的位点特异性赖氨酸乙酰化和天然折叠蛋白的表达和纯化
DOI：
10.1007/978-1-4939-7574-7_11
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发表时间：
2018
影响因子：
--
通讯作者：
Lammers M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lammers M.
N-(ε)-赖氨酸乙酰化（简称：赖氨酸乙酰化）是一种动态且强大的翻译后修饰，可调节蛋白质功能。突变方法通常很难在分子水平上了解赖氨酸乙酰化的真正机制影响。因此，将 N-(ε)-乙酰基-L-赖氨酸（简称：AcK）定点整合到蛋白质中的能力极大地增加了我们对赖氨酸乙酰化如何通过使用远远超出中和赖氨酸侧链正电荷的不同分子机制来调节蛋白质功能的理解。基因编码 AcK 是将 AcK 引入蛋白质的有效方法，从而产生同质、定量和位点特异性的赖氨酸乙酰化蛋白质。因此，赖氨酸乙酰化蛋白质可以在其天然折叠状态下以高质量和足以进行生物物理研究（包括X射线晶体学）的产率产生。该协议描述了大肠杆菌中位点特异性赖氨酸乙酰化蛋白的表达和纯化，使用遗传密码扩展概念 (GCEC) 以及通过免疫印迹和质谱评估 AcK 成功掺入的后续步骤。
N-(ε)-lysine-acetylation (short: lysine-acetylation) is a dynamic and powerful posttranslational modification to regulate protein function. Mutational approaches are often poor to access the real mechanistic impact of lysine-acetylation at the molecular level. Therefore, the ability to site-specifically incorporateN-(ε)-acetyl-l-lysine (short: AcK) into proteins dramatically increased our understanding how lysine-acetylation regulates protein function by using diverse molecular mechanisms going far beyond neutralizing a positive charge at the lysine-side chain. Genetically encoding AcK is a powerful way to introduce AcK into proteins, resulting in homogenously, quantitatively, and site-specifically lysine-acetylated proteins. Thereby, lysine-acetylated proteins can be produced in their natively-folded state in a high quality and in a yield sufficient to perform biophysical studies, including X-ray crystallography. This protocol describes the expression and purification of site-specifically lysine-acetylated proteins inEscherichia coliusing the genetic-code expansion concept (GCEC) and subsequent steps to assess the successful incorporation of AcK by immunoblotting and mass-spectrometry.
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影响因子：
4
作者：
Niu W;Schultz PG;Guo J
通讯作者：
Guo J
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影响因子：
2.9
作者：
Kuhlmann;Wroblowski;Scislowski;Lammers
通讯作者：
Lammers
DOI：
10.1073/pnas.1505995112
发表时间：
2015-07-14
影响因子：
11.1
作者：
de Boor, Susanne;Knyphausen, Philipp;Lammers, Michael
通讯作者：
Lammers, Michael
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影响因子：
--
作者：
Susan J. Smith;K. Rittinger
通讯作者：
K. Rittinger
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作者：
Robinson, Philip J. J.;An, Woojin;Rhodes, Daniela
通讯作者：
Rhodes, Daniela