Reconstitution of the mia40-erv1 oxidative folding pathway for the small tim proteins.
Reconstitution of the mia40-erv1 oxidative folding pathway for the small tim proteins.
复制标题
小 Tim 蛋白的 mia40-erv1 氧化折叠途径的重建。
DOI：
10.1091/mbc.e08-10-1062
复制
发表时间：
2009
影响因子：
3.3
通讯作者：
Koehler,CarlaM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tienson,HeatherL;Dabir,DeepaV;Neal,SonyaE;Loo,Rachel;Hasson,SamuelA;Boontheung,Pinmanee;Kim,Sung-Kun;Loo,JosephA;Koehler,CarlaM
Mia40 和 Erv1 执行二硫键中继，将小 Tim 蛋白导入线粒体膜间隙。在这里，我们以 Tim13 作为底物在体外重建了氧化折叠途径，并确定了 Mia40 和 Tim13 的中点电位。具体来说，Mia40作为Tim13的直接氧化剂，而Erv1需要重新氧化Mia40。在氧化过程中，四个电子从 Tim13 转移，并连续插入两个二硫键。 Tim13 氧化程度直接取决于 Mia40 浓度，与 Erv1 浓度无关。中点电位的表征表明，电子从具有更负的中点电位-310 mV的Tim13经由具有-290 mV的中间中点电位的Mia40流到具有-150 mV的正中点电位的Erv1的C130-C133对。 Tim13-Mia40 和 Mia40-Erv1 之间的中间复合物被捕获。最后，突变Erv1中催化C130-C133对的C133或穿梭C30-C33对的C30消除了Tim13的氧化，而突变氧化还原活性CPC基序中的半胱氨酸，而不是Mia40的CX9C基序的结构二硫键，阻止了Tim13氧化。因此，我们证明 Mia40、Erv1 和氧气是 Tim13 氧化的最小机制。
Mia40 and Erv1 execute a disulfide relay to import the small Tim proteins into the mitochondrial intermembrane space. Here, we have reconstituted the oxidative folding pathway in vitro with Tim13 as a substrate and determined the midpoint potentials of Mia40 and Tim13. Specifically, Mia40 served as a direct oxidant of Tim13, and Erv1 was required to reoxidize Mia40. During oxidation, four electrons were transferred from Tim13 with the insertion of two disulfide bonds in succession. The extent of Tim13 oxidation was directly dependent on Mia40 concentration and independent of Erv1 concentration. Characterization of the midpoint potentials showed that electrons flowed from Tim13 with a more negative midpoint potential of −310 mV via Mia40 with an intermediate midpoint potential of −290 mV to the C130-C133 pair of Erv1 with a positive midpoint potential of −150 mV. Intermediary complexes between Tim13-Mia40 and Mia40-Erv1 were trapped. Last, mutating C133 of the catalytic C130-C133 pair or C30 of the shuttle C30-C33 pair in Erv1 abolished oxidation of Tim13, whereas mutating the cysteines in the redox-active CPC motif, but not the structural disulfide linkages of the CX9C motif of Mia40, prevented Tim13 oxidation. Thus, we demonstrate that Mia40, Erv1, and oxygen are the minimal machinery for Tim13 oxidation.
登录
查看更多内容
莱茵衣藻硫氧还蛋白 h 35-40 氧化还原位点的单突变 Trp35-->Ala 影响其生化活性和 C36-C39 1H-13C NMR 的 pH 依赖性。
DOI：
10.1046/j.1432-1327.1998.2550185.x
发表时间：
1998
期刊：
European journal of biochemistry
影响因子：
--
作者：
I. Krimm;S. Lemaire;E. Ruelland;M. Miginiac‐Maslow;Jean‐Pierre Jaquot;M. Hirasawa;D. Knaff;J. Lancelin
通讯作者：
J. Lancelin
完全或特定部分乙酰亚胺化对细胞色素 c 和细胞色素 c-T 生物学特性的影响。
DOI：
10.1042/bj2170595
发表时间：
1984
期刊：
The Biochemical journal
影响因子：
--
作者：
C. Wallace
通讯作者：
C. Wallace
DOI：
10.1016/j.bbamcr.2007.12.005
发表时间：
2008-04-01
影响因子：
5.1
作者：
Hell, Kai
通讯作者：
Hell, Kai
影响因子：
2.9
作者：
Farrell, SR;Thorpe, C
通讯作者：
Thorpe, C
影响因子：
6.8
作者：
AKAIKE, H
通讯作者：
AKAIKE, H