Two-Dimensional Gel Electrophoresis-Based Proteomic Analysis Reveals N-terminal Truncation of the Hsc70 Protein in Cotton Fibers In Vivo.
Two-Dimensional Gel Electrophoresis-Based Proteomic Analysis Reveals N-terminal Truncation of the Hsc70 Protein in Cotton Fibers In Vivo.
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基于二维凝胶电泳的蛋白质组学分析揭示体内棉纤维中 Hsc70 蛋白的 N 末端截短
DOI：
10.1038/srep36961
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发表时间：
2016-11-11
影响因子：
4.6
通讯作者：
Li H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tao C;Jin X;Zhu L;Li H
在二维电泳凝胶上，来自棉花胚珠和纤维的 6 个蛋白点被鉴定为热休克同源 70 kD 蛋白 (Hsc70)。三个点对应于 70 kD 的实验分子量 (MW)（点 1、2 和 3），其余三个点对应于略大于 45 kD 的实验分子量（点 4、5 和 6）。蛋白质点 1、2 和 3 在 0 天（开花当天）野生型 (WT) 胚珠、0 天无绒毛突变体胚珠和 10 天 WT 胚珠的凝胶上丰富，但在 10 天 WT 纤维的凝胶中不存在。通过使用 cDNA 末端快速扩增 (RACE) 获得编码这六个蛋白质点的三个单独的转录本。 Edman 降解和蛋白质印迹证实三个 45 kD Hsc70 蛋白点具有相同的 N 末端，均从完整 Hsc70 蛋白中的 T271 氨基酸开始。此外，四极杆飞行时间质谱分析发现蛋白点4和5的475位精氨酸存在甲基化修饰。我们的数据表明，Hsc70蛋白的位点特异性体内N端截短在棉纤维中特别普遍，表明翻译后调控可能在棉纤维发育中发挥重要作用。
On two-dimensional electrophoresis gels, six protein spots from cotton ovules and fibers were identified as heat shock cognate 70 kD protein (Hsc70). Three spots corresponded to an experimental molecular weight (MW) of 70 kD (spots 1, 2 and 3), and the remaining three spots corresponded to an experimental MW slightly greater than 45 kD (spots 4, 5 and 6). Protein spots 1, 2 and 3 were abundant on gels of 0-day (the day of anthesis) wild-type (WT) ovules, 0-day fuzzless-lintless mutant ovules and 10-day WT ovules but absent from gels of 10-day WT fibers. Three individual transcripts encoding these six protein spots were obtained by using rapid amplification of cDNA ends (RACE). Edman degradation and western blotting confirmed that the three 45 kD Hsc70 protein spots had the same N-terminal, which started from the T271 amino acid in the intact Hsc70 protein. Furthermore, quadrupole time-of-flight mass spectrometry analysis identified a methylation modification on the arginine at position 475 for protein spots 4 and 5. Our data demonstrate that site-specific in vivo N-terminal truncation of the Hsc70 protein was particularly prevalent in cotton fibers, indicating that post-translational regulation might play an important role in cotton fiber development.
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