Efficient, complete deletion of synaptic proteins using CRISPR.
Efficient, complete deletion of synaptic proteins using CRISPR.
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DOI：
10.1016/j.neuron.2014.07.043
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发表时间：
2014-09-03
期刊：
影响因子：
16.2
通讯作者：
Nicoll, Roger A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Incontro, Salvatore;Asensio, Cedric S.;Edwards, Robert H.;Nicoll, Roger A.
测试蛋白质功能最有效的方法之一是描述其缺失的后果。在过去，这涉及到在种系中通过同源重组或后来通过条件缺失使基因失活。RNA干扰（RNAi）提供了另一种敲除蛋白质的方法，但这两种方法都有其局限性。最近，CRISPR/Cas9系统提出了另一种选择性灭活基因的方法。我们现在已经在有丝分裂后神经元中测试了该系统，通过靶向两种特征明确的突触蛋白，NMDA受体的义务GluN1亚基和AMPA受体的GluA2亚基。CRISPR/Cas9在海马切片培养中的表达完全消除了NMDA受体和GluA2功能。因此，CRISPR/Cas9为研究突触蛋白的功能提供了一个强有力的工具。
One of the most powerful ways to test the function of a protein is to characterize the consequences of its deletion. In the past, this has involved inactivation of the gene by homologous recombination either in the germline or later through conditional deletion. RNA interference (RNAi) provides an alternative way to knock down proteins, but both of these approaches have their limitations. Recently, the CRISPR/Cas9 system has suggested another way to selectively inactivate genes. We have now tested this system in postmitotic neurons by targeting two well-characterized synaptic proteins, the obligatory GluN1 subunit of the NMDA receptor and the GluA2 subunit of the AMPA receptor. Expression of CRISPR/Cas9 in hippocampal slice cultures completely eliminated NMDA receptor and GluA2 function. CRISPR/Cas9 thus provides a powerful tool to study the function of synaptic proteins.
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