Co-expression of RNA-protein complexes in Escherichia coli and applications to RNA biology.
Co-expression of RNA-protein complexes in Escherichia coli and applications to RNA biology.
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DOI：
10.1093/nar/gkt576
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发表时间：
2013-08
影响因子：
14.9
通讯作者：
Tisné C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ponchon L;Catala M;Seijo B;El Khouri M;Dardel F;Nonin-Lecomte S;Tisné C
RNA在许多细胞过程中扮演着重要角色。在分子水平上理解这些过程需要均匀的RNA样本进行结构、生化和药理学研究。我们之前设计了一种通用的方法，可以在大肠杆菌中有效地在体内表达重组RNA。在这项工作中，我们将这种方法扩展到RNA/蛋白共表达。我们已经设计了几种质粒，使rna -蛋白复合物在大肠杆菌中过表达。我们已经研究了这些工具在许多应用中的潜力，包括生产封装在病毒蛋白伪颗粒中的核酸敏感RNA，与伴侣蛋白合作生产非编码RNA，通过与适当的修饰酶合作生产结合转录后RNA修饰，最后通过镍亲和层析法生产和纯化RNA - his标记的蛋白质复合物。我们表明，最后一种应用很容易为晶体学研究提供纯材料。我们报告的新工具将为RNA功能和与蛋白质相互作用的大规模结构和分子研究铺平道路。
RNA has emerged as a major player in many cellular processes. Understanding these processes at the molecular level requires homogeneous RNA samples for structural, biochemical and pharmacological studies. We previously devised a generic approach that allows efficient in vivo expression of recombinant RNA in Escherichia coli. In this work, we have extended this method to RNA/protein co-expression. We have engineered several plasmids that allow overexpression of RNA–protein complexes in E. coli. We have investigated the potential of these tools in many applications, including the production of nuclease-sensitive RNAs encapsulated in viral protein pseudo-particles, the co-production of non-coding RNAs with chaperone proteins, the incorporation of a post-transcriptional RNA modification by co-production with the appropriate modifying enzyme and finally the production and purification of an RNA–His-tagged protein complex by nickel affinity chromatography. We show that this last application easily provides pure material for crystallographic studies. The new tools we report will pave the way to large-scale structural and molecular investigations of RNA function and interactions with proteins.
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