Engineering a tunable micropattern-array assay to sort single extracellular vesicles and particles to detect RNA and protein in situ.
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DOI：
10.1002/jev2.12369
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发表时间：
2023-11
影响因子：
16
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
细胞外囊泡（EV）的分子异质性和物理相似颗粒（如脂蛋白（LP））的共分离混淆并限制了EV批量生物标志物表征的灵敏度。在此，我们提出了一种单EV和颗粒（siEVP）蛋白和RNA检测（siEVPPRA），以同时检测EV和LP亚群中的mRNA、miRNA和蛋白。siEVPPRA通过阳性免疫选择将颗粒固定和分类到微图案上，并原位聚焦生物分子信号。通过以单颗粒分辨率检测EVP，siEVPPRA的灵敏度优于RNA和蛋白质批量分析基准测定的灵敏度。为了评估复杂生物流体中RNA检测的特异性，用小RNA测序处理来自各种胶质瘤细胞系的EV，从而选择与多形性胶质母细胞瘤（GBM）相关的两种mRNA和两种miRNA进行交叉验证。尽管血清中存在单一EV LP共分离株，但siEVPPRA在GBM患者siEVP中检测到GBM相关囊泡RNA谱。siEVPPRA可有效检查囊内、囊间和颗粒间异质性，具有诊断前景。
The molecular heterogeneity of extracellular vesicles (EVs) and the co‐isolation of physically similar particles, such as lipoproteins (LPs), confounds and limits the sensitivity of EV bulk biomarker characterization. Herein, we present a single‐EV and particle (siEVP) protein and RNA assay (siEVPPRA) to simultaneously detect mRNAs, miRNAs, and proteins in subpopulations of EVs and LPs. The siEVPPRA immobilizes and sorts particles via positive immunoselection onto micropatterns and focuses biomolecular signals in situ. By detecting EVPs at a single‐particle resolution, the siEVPPRA outperformed the sensitivities of bulk‐analysis benchmark assays for RNA and protein. To assess the specificity of RNA detection in complex biofluids, EVs from various glioma cell lines were processed with small RNA sequencing, whereby two mRNAs and two miRNAs associated with glioblastoma multiforme (GBM) were chosen for cross‐validation. Despite the presence of single‐EV‐LP co‐isolates in serum, the siEVPPRA detected GBM‐associated vesicular RNA profiles in GBM patient siEVPs. The siEVPPRA effectively examines intravesicular, intervesicular, and interparticle heterogeneity with diagnostic promise.
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DOI：
10.1007/978-1-4939-7652-2_13
发表时间：
2018-01-01
期刊：
EXTRACELLULAR RNA: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Etheridge, Alton;Wang, Kai;Galas, David
通讯作者：
Galas, David