Suborganelle sensing of mitochondrial cAMP-dependent protein kinase activity.
Suborganelle sensing of mitochondrial cAMP-dependent protein kinase activity.
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DOI：
10.1021/ja909652q
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发表时间：
2010-05-05
影响因子：
15
通讯作者：
Lawrence DS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Agnes RS;Jernigan F;Shell JR;Sharma V;Lawrence DS
蛋白激酶活性的荧光传感器已被开发并用于表征线粒体中cAMP依赖性蛋白激酶活性的区室化位置。该传感器通过磷酸化诱导的猝灭剂从基于肽的底物中释放而发挥作用，产生150倍的荧光增强。淬灭现象经由淬灭剂与位于肽底物上的Arg残基的相互作用而发生。虽然已知cAMP依赖性蛋白激酶存在于线粒体中，但位于细胞器主要隔室（外膜、膜间隙和基质）中的酶的相对量尚不清楚。本研究利用自行研制的荧光传感器，研究了PKA在牛心肌线粒体中的相对基质：膜间隙：外膜（85：6：9）分布。
A fluorescent sensor of protein kinase activity has been developed and used to characterize the compartmentalized location of cAMP-dependent protein kinase activity in mitochondria. The sensor functions via a phosphorylation-induced release of a quencher from a peptide-based substrate, producing a 150-fold enhancement in fluorescence. The quenching phenomenon transpires via interaction of the quencher with Arg residues positioned on the peptide substrate. Although the cAMP-dependent protein kinase is known to be present in mitochondria, the relative amount of enzyme positioned in the major compartments (outer membrane, intermembrane space, and the matrix) of the organelle is unclear. The fluorescent sensor developed in this study was used to reveal the relative matrix:intermembrane space:outer membrane (85:6:9) distribution of PKA in bovine heart mitochondria.
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