Quantitative analysis of tryptophan analogue incorporation in recombinant proteins.
Quantitative analysis of tryptophan analogue incorporation in recombinant proteins.
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重组蛋白中色氨酸类似物掺入的定量分析。
DOI：
10.1006/abio.2001.5441
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发表时间：
2002
影响因子：
2.9
通讯作者：
Ross,JBAlexander
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Senear,DonaldF;Mendelson,RobertA;Stone,DeborahB;Luck,LindaA;Rusinova,Elena;Ross,JBAlexander
本文介绍了三种不同的定量色氨酸（Trp）类似物掺入重组蛋白的方法：第一种是基于变性的含Trp或类似物取代蛋白中芳香残基吸收光谱的线性组合的光谱分析，第二种是用HPLC色谱分离类似物取代蛋白和含Trp的蛋白，第三种是用HPLC色谱分离含Trp的蛋白。以及第三，类似物取代的和含Trp的蛋白质的混合物的质谱分析。通过分析吸收光谱或HPLC色谱法，可以直接获得单色氨酸蛋白中类似物掺入的准确估计。虽然吸收光谱或HPLC色谱图的分析可以提供对含有两个或更多个Trp残基的蛋白质的类似物掺入的平均水平的评估，但是对通过蛋白酶消化产生并通过HPLC分离的肽的质谱分析提供了对类似物掺入的分布进行完整定量描述的一般方法。更复杂的质谱分析变得重要的多色氨酸蛋白质，因为分布的类似物与色氨酸含多肽链可能不相同的基础上预测的平均水平的类似物掺入。
Three different methods to quantitate tryptophan (Trp) analogue incorporation into recombinant proteins are described: first, spectroscopic analysis based on a linear combination of the absorption spectra of the aromatic residues in the denatured Trp-containing or analogue-substituted protein; second, chromatographic separation of analogue-substituted and Trp-containing proteins by HPLC; and third, mass spectrum analysis of the mixture of analogue-substituted and Trp-containing proteins. An accurate estimate of analogue incorporation in single-Trp proteins can be obtained directly by either analysis of the absorption spectrum or HPLC chromatography. While analysis of the absorption spectrum or HPLC chromatogram can provide an assessment of the average level of analogue incorporation for proteins that contain two or more Trp residues, mass spectroscopy analysis of peptides generated by protease digestion and separated by HPLC provides a general method for a complete quantitative description of the distribution of analogue incorporation. The more complex analysis by mass spectroscopy becomes important for multi-Trp proteins because the distribution of analogue versus Trp-containing polypeptide chains may not be the same as that predicted on the basis of average level of analogue incorporation.
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