Functional immunoliposomes harboring a biosynthetically lipid-tagged single-chain antibody.
Functional immunoliposomes harboring a biosynthetically lipid-tagged single-chain antibody.
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功能性免疫脂质体含有生物合成的脂质标记单链抗体。
作者：
M. Laukkanen;K. Alfthan;K. Keinänen
抗 2-苯基恶唑酮单链抗体在大肠杆菌中作为脂蛋白融合物表达，以产生生物合成脂质标记分子 [Laukkanen 等人，2017]。 (1993) 蛋白质工程。 6、449-454]。为了纯化，将六组氨酸标签引入到蛋白质的 C 末端。所得抗体被称为Ox lpp-scFv-H6，是膜结合的，显示出半抗原结合活性，并且含有脂蛋白特异性脂质修饰，如代谢[3H]棕榈酸标记所示。通过固定化金属亲和层析、随后基于半抗原的亲和层析纯化Ox lpp-scFv-H6，以达到基本同质性，产量为0.4-1.6mg/L培养物。在去垢剂透析中，纯化的抗体定量分配到磷脂脂质体中。通过使用 ELISA 和基于表面等离子共振 (SPR) 的实时生物特异性相互作用分析测量，由同质单层 100-200 nm 囊泡群组成的免疫脂质体制剂显示出特异性的半抗原结合活性。在SPR实验中，与可溶性抗体片段相比，免疫脂质体表现出与固定半抗原几乎不可逆的结合，这与预测的多价结合一致。抗体的生物合成脂质标记可能对基于免疫脂质体的诊断和治疗应用有用。
An anti-2-phenyloxazolone single-chain antibody was expressed in Escherichia coli as a lipoprotein fusion in order to generate a biosynthetically lipid-tagged molecule [Laukkanen et al. (1993) Protein Eng. 6, 449-454]. For purification, a hexahistidinyl tag was introduced to the C-terminus of the protein. The resulting antibody, termed Ox lpp-scFv-H6, was membrane-bound, displayed hapten-binding activity, and contained the lipoprotein-specific lipid modification as indicated by metabolic [3H]palmitic acid labeling. The Ox lpp-scFv-H6 was purified by immobilized metal affinity chromatography followed by hapten-based affinity chromatography to essential homogeneity with a yield of 0.4-1.6 mg/L of culture. In detergent dialysis, the purified antibody partitioned quantitatively into phospholipid liposomes. The immunoliposome preparation consisting of a homogeneous population of unilamellar 100-200 nm vesicles displayed specific hapten-binding activity as measured by using ELISA and surface plasmon resonance (SPR)-based real-time biospecific interaction analysis. In SPR experiments, the immunoliposomes exhibited virtually irreversible binding to immobilized hapten compared to soluble antibody fragments, consistent with the predicted multivalent binding. Biosynthetic lipid-tagging of antibodies may prove useful for immunoliposome-based diagnostic and therapeutic applications.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(19)70595-x
发表时间：
1980-09
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
A. Huang;L. Huang;S. Kennel
通讯作者：
A. Huang;L. Huang;S. Kennel
pH 敏感的免疫脂质体介导小鼠体内外源基因的靶细胞特异性递送和受控表达。
DOI：
10.1073/pnas.84.22.7851
发表时间：
1987
影响因子：
11.1
作者：
Wang,CY;Huang,L
通讯作者：
Huang,L
影响因子：
2.9
作者：
M. Tai;Meredith Mudgett-Hunter;Douglas Levinson;Gay‐May Wu;Edgar Haber;Hermann Oppermann;James S. Huston
通讯作者：
M. Tai;Meredith Mudgett-Hunter;Douglas Levinson;Gay‐May Wu;Edgar Haber;Hermann Oppermann;James S. Huston
脂蛋白NH2末端的9个氨基酸残基足以对其在大肠杆菌外膜中进行修饰、加工和定位。
DOI：
--
发表时间：
1984
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Ghrayeb,J;Inouye,M
通讯作者：
Inouye,M
单克隆抗体将脂质体靶向体内小鼠肺。
影响因子：
11.2
作者：
Hughes,BJ;Kennel,S;Lee,R;Huang,L
通讯作者：
Huang,L