DNA binding and synapsis by the large C-terminal domain of phiC31 integrase.
DNA binding and synapsis by the large C-terminal domain of phiC31 integrase.
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DOI：
10.1093/nar/gkp485
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发表时间：
2009-08
影响因子：
14.9
通讯作者：
Smith MC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McEwan AR;Rowley PA;Smith MC
来自噬菌体 phiC31 的整合酶 (Int) 作用于噬菌体和宿主附着位点 attP 和 attB，形成侧翼为 attL 和 attR 的整合原噬菌体。在没有辅助因子的情况下，C 端结构域 (CTD) 中假定的卷曲螺旋基序可防止切除（attL × attR 重组）。 Int 具有丝氨酸重组酶 N 末端结构域，是重组底物联会和催化所必需的。我们在此表明，卷曲螺旋基序介导 CTD 之间的蛋白质-蛋白质相互作用，但仅限于与 DNA 结合时。尽管组氨酸标记的 CTD (hCTD) 在溶液中是单体，但 hCTD 与三种重组底物（attB、attL 和 attR）协同结合。此外，当提供 attP 和 attB 时，hCTD 将这些底物结合在一起形成突触复合体。卷曲螺旋基序中的取代 L460P 和 Y475H 大大降低了 Int 整合活性，阻止了 CTD-CTD 相互作用，并导致 DNA 结合缺陷和无法检测到 DNA 突触。全长 Int 中的替换 E449K 赋予除了整合之外执行切除的能力，因为它获得了突触 attL × attR 的能力。 hCTDE449K 在 DNA 结合方面与 hCTD 相似，但无法形成 CTD 突触，表明 CTD 突触不是必需的，但可能是控制方向性机制的一部分。
The integrase (Int) from phage ϕC31 acts on the phage and host-attachment sites, attP and attB, to form an integrated prophage flanked by attL and attR. Excision (attL × attR recombination) is prevented, in the absence of accessory factors, by a putative coiled-coil motif in the C-terminal domain (CTD). Int has a serine recombinase N-terminal domain, required for synapsis of recombination substrates and catalysis. We show here that the coiled-coil motif mediates protein–protein interactions between CTDs, but only when bound to DNA. Although the histidine-tagged CTD (hCTD) was monomeric in solution, hCTD bound cooperatively to three of the recombination substrates (attB, attL and attR). Furthermore, when provided with attP and attB, hCTD brought these substrates together in a synaptic complex. Substitutions in the coiled-coil motif that greatly reduce Int integration activity, L460P and Y475H, prevented CTD–CTD interactions and led to defective DNA binding and no detectable DNA synapsis. A substitution, E449K, in full length Int confers the ability to perform excision in addition to integration as it has gained the ability to synapse attL × attR. hCTDE449K was similar to hCTD in DNA binding but unable to form the CTD synapse suggesting that the CTD synapse is not essential but could be part of the mechanism that controls directionality.
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影响因子：
14.9
作者：
Rowley, Paul A.;Smith, Matthew C. A.;Younger, Ellen;Smith, Margaret C. M.
通讯作者：
Smith, Margaret C. M.
影响因子：
14.9
作者：
Cole C;Barber JD;Barton GJ
通讯作者：
Barton GJ
DOI：
10.1073/pnas.95.10.5505
发表时间：
1998-05-12
影响因子：
11.1
作者：
Thorpe, HM;Smith, MCM
通讯作者：
Smith, MCM
影响因子：
14.9
作者：
Smith, MCA;Till, R;Smith, MCM
通讯作者：
Smith, MCM
ATTB中影响PHIC31积分酶突触和激活DNA裂解的能力的序列。
影响因子：
14.9
作者：
Gupta, Milind;Till, Rob;Smith, Margaret C M
通讯作者：
Smith, Margaret C M