Printing 2-dimentional droplet array for single-cell reverse transcription quantitative PCR assay with a microfluidic robot.
Printing 2-dimentional droplet array for single-cell reverse transcription quantitative PCR assay with a microfluidic robot.
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使用微流控机器人打印用于单细胞逆转录定量 PCR 测定的二维液滴阵列
DOI：
10.1038/srep09551
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发表时间：
2015-04-01
影响因子：
4.6
通讯作者：
Yao B
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhu Y;Zhang YX;Liu WW;Ma Y;Fang Q;Yao B
本文描述了一种基于纳升液滴阵列的单细胞逆转录定量PCR（RT-qPCR）测定方法，用于定量单个细胞中的基因表达。通过使用微流控机器人在微芯片上顺序打印纳升级液滴，可以自动实现所有液体处理操作，包括细胞包封、裂解、逆转录和实时荧光检测的定量PCR。为了实现高灵敏度的基因定量，对细胞悬浮液对RT-PCR检测的抑制作用进行了全面研究。将该系统应用于单个Huh-7细胞中mir-122表达水平的定量测量。观察到单个细胞中mir-122表达的广泛分布，从3061拷贝/细胞到79998拷贝/细胞，显示出高水平的细胞异质性。该方法具有液体处理全自动化、系统结构简单、可灵活实现多步操作等优点，为单细胞基因表达分析提供了一种全新的液体处理模式，在转录鉴定和稀有细胞分析中具有重要的应用潜力。
This paper describes a nanoliter droplet array-based single-cell reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) assay method for quantifying gene expression in individual cells. By sequentially printing nanoliter-scale droplets on microchip using a microfluidic robot, all liquid-handling operations including cell encapsulation, lysis, reverse transcription and quantitative PCR with real-time fluorescence detection, can be automatically achieved. The inhibition effect of cell suspension buffer on RT-PCR assay was comprehensively studied to achieve high-sensitivity gene quantification. The present system was applied in the quantitative measurement of expression level of mir-122 in single Huh-7 cells. A wide distribution of mir-122 expression in single cells from 3061 copies/cell to 79998 copies/cell was observed, showing a high level of cell heterogeneity. With the advantages of full-automation in liquid-handling, simple system structure and flexibility in achieving multi-step operations, the present method provides a novel liquid-handling mode for single cell gene expression analysis and has significant potentials in transcriptional identification and rare cell analysis.
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影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
7.4
作者：
Chiu DT;Lorenz RM;Jeffries GD
通讯作者：
Jeffries GD
DOI：
10.1073/pnas.1402030111
发表时间：
2014-05-13
影响因子：
11.1
作者：
Streets, Aaron M.;Zhang, Xiannian;Huang, Yanyi
通讯作者：
Huang, Yanyi
影响因子：
11.8
作者：
Guo, Guoji;Huss, Mikael;Robson, Paul
通讯作者：
Robson, Paul
影响因子：
7.4
作者：
Liu, Chuansen;Liu, Jiangjiang;Lin, Jin-Ming
通讯作者：
Lin, Jin-Ming