Recombinant expression, characterization, and quantification in human cancer cell lines of the Anaplastic Large-Cell Lymphoma-characteristic NPM-ALK fusion protein
Recombinant expression, characterization, and quantification in human cancer cell lines of the Anaplastic Large-Cell Lymphoma-characteristic NPM-ALK fusion protein
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间变性大细胞淋巴瘤特征性 NPM-ALK 融合蛋白在人类癌细胞系中的重组表达、表征和定量
DOI：
10.1038/s41598-020-61936-w
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发表时间：
2020
影响因子：
4.6
通讯作者：
Willson, Richard C.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kourentzi, Katerina;Crum, Mary;Patil, Ujwal;Prebisch, Ana;Chavan, Dimple;Vu, Binh;Zeng, Zihua;Litvinov, Dmitri;Zu, Youli;Willson, Richard C.
系统性间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）是一种侵袭性T细胞淋巴瘤，最常见于儿童和年轻人。大多数儿童ALCL与t（2;5）（p23;q35）易位相关，该易位将间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因与核磷蛋白（NPM）基因融合。NPM-ALK融合蛋白是一种组成型活性酪氨酸激酶，在肿瘤发病机制中起重要作用。为了推进新的诊断方法和理解这种融合蛋白在癌细胞中的功能，我们表达了inE。大肠杆菌，纯化和表征的人NPM-ALK融合蛋白，用作评估培养的人ALCL细胞中表达水平的标准，这是ALCL病理生物学研究的关键工具。我们估计NPM-ALK融合蛋白在Karpas 299和SU-DHL-1细胞中均以实质性水平表达（约100%）。4-6 100万个分子或0.5-0.7 pg蛋白/细胞;基于我们内部开发的NPM-ALK ELISA; LOD为40 pM），与普遍存在的β-肌动蛋白（约64百万个分子或4.5pg/淋巴细胞）。我们还比较了通过ELISA测定的NPM-ALK/ β-actin比值与通过双向电泳独立测定的比值，结果表明两种方法具有良好的一致性。
Systemic anaplastic large cell lymphoma (ALCL) is an aggressive T-cell lymphoma most commonly seen in children and young adults. The majority of pediatric ALCLs are associated with the t(2;5)(p23;q35) translocation which fuses the Anaplastic Lymphoma Kinase (ALK) gene with the Nucleophosmin (NPM) gene. The NPM-ALK fusion protein is a constitutively-active tyrosine kinase, and plays a major role in tumor pathogenesis. In an effort to advance novel diagnostic approaches and the understanding of the function of this fusion protein in cancer cells, we expressed inE. coli,purified and characterized human NPM-ALK fusion protein to be used as a standard for estimating expression levels in cultured human ALCL cells, a key tool in ALCL pathobiology research. We estimated that NPM-ALK fusion protein is expressed at substantial levels in both Karpas 299 and SU-DHL-1 cells (ca. 4–6 million molecules or 0.5–0.7 pg protein per cell; based on ourin-housedeveloped NPM-ALK ELISA; LOD of 40 pM) as compared to the ubiquitous β-actin protein (ca. 64 million molecules or 4.5 pg per lymphocyte). We also compared NPM-ALK/ β-actin ratios determined by ELISA to those independently determined by two-dimensional electrophoresis and showed that the two methods are in good agreement.
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