An easy pipeline for one-step purification of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein from insect cell suspension culture.
An easy pipeline for one-step purification of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein from insect cell suspension culture.
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DOI：
10.1016/j.jviromet.2021.114341
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发表时间：
2022-01
影响因子：
3.1
通讯作者：
Ribeiro BM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
de Camargo BR;da Silva LA;de Oliveira AS;Ribeiro BM
新冠肺炎大流行需要一系列生物技术产品来检测SARS-CoV-2变种，并评估感染或接种疫苗后的人类血清转换。在这项工作中，我们描述了一种在昆虫细胞中表达SARS-CoV-2核衣壳蛋白的简便方法，并通过亲和层析对其进行纯化。利用转座法将N基因克隆到链纹夜蛾多核型多角体病毒(AcMNPV)基因组中，构建的重组杆状病毒用于感染适应高密度悬浮的鳞翅目昆虫Sf9细胞。以Tris−HCl pH 8.0为流动相，用175 mM咪唑洗脱结合蛋白进行三步梯度洗脱，每50 mg纯化上清液平均可纯化1 mg N蛋白。这样的蛋白质含量使血清学测试的制作和对SARS-CoV-2细胞反应的基础研究得以发展。
The COVID-19 pandemic has demanded a range of biotechnological products for detection of SARS-CoV-2 variants and evaluation of human seroconversion after infection or vaccination. In this work, we describe an easy pipeline for expression of SARS-CoV-2 nucleocapsid (N) protein in insect cells followed by its purification via affinity chromatography. The N gene was cloned into the genome of Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) via transposition and the resulting recombinant baculovirus was used for infection of lepidopteran Sf9 cells adapted to high-density suspension. Using Tris−HCl pH 8.0 buffer as mobile phase and eluting bound proteins with 175 mM imidazole as part of a three-step gradient, an average of 1 mg N protein could be purified from each 50 mg of total protein from clarified supernatant. Such protein amount allows the manufacturing of serological tests and the development of basic studies on cellular responses to SARS-CoV-2.
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影响因子：
3.7
作者：
Djukic T;Mladenovic M;Stanic-Vucinic D;Radosavljevic J;Smiljanic K;Sabljic L;Devic M;Cujic D;Vasovic T;Simovic A;Radomirovic M;Cirkovic Velickovic T
通讯作者：
Cirkovic Velickovic T
影响因子：
9.2
作者：
Cho H;Jang Y;Park KH;Choi H;Nowakowska A;Lee HJ;Kim M;Kang MH;Kim JH;Shin HY;Oh YK;Kim YB
通讯作者：
Kim YB
SARS-COV-2 Nucleocapsid蛋白的免疫信息分析和COVID-19疫苗靶标的鉴定。
影响因子：
7.3
作者：
Oliveira SC;de Magalhães MTQ;Homan EJ
通讯作者：
Homan EJ
DOI：
10.1016/j.bbrc.2020.06.020
发表时间：
2020-08-20
影响因子：
3.1
作者：
Fujita, Ryosuke;Hino, Masato;Kusakabe, Takahiro
通讯作者：
Kusakabe, Takahiro
DOI：
10.1016/b978-012253840-7/50013-4
发表时间：
1999-01-01
期刊：
GENE EXPRESSION SYSTEMS
影响因子：
--
作者：
Galleno, M;Sick, AJ
通讯作者：
Sick, AJ