Expression, purification and immunological characterization of recombinant nucleocapsid protein fragment from SARS-CoV-2.
Expression, purification and immunological characterization of recombinant nucleocapsid protein fragment from SARS-CoV-2.
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DOI：
10.1016/j.virol.2021.01.004
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发表时间：
2021-05
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Cirkovic Velickovic T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Djukic T;Mladenovic M;Stanic-Vucinic D;Radosavljevic J;Smiljanic K;Sabljic L;Devic M;Cujic D;Vasovic T;Simovic A;Radomirovic M;Cirkovic Velickovic T
血清学检测是诊断严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）感染的重要方法。核衣壳（N）蛋白是最丰富的病毒衍生蛋白和强免疫原。我们的目标是找到其高效、低成本的生产方式。 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白重组片段（rfNP；58-419 aa）在大肠杆菌中以可溶形式表达、纯化并进行生化和免疫学表征。纯化的rfNP具有全长重组N蛋白的二级结构，其中无序结构（34.2％）和β-折叠（40.7％）的比例很高。使用 COVID-19 康复患者的血清进行免疫印迹测试 rfNP。使用 RT-PCR 确认的阳性症状患者和健康个体的血清优化 ELISA。 IgG 检测灵敏度为 96% (47/50)，特异性为 97% (67/68)，而 IgM 检测略低（分别为 94% 和 96.5%）。开发了具有成本效益的可溶性重组 N 蛋白片段生产方法，并通过可靠的 IgG 和 IgM 抗体检测 SARS-CoV-2 感染。
Serological testing is important method for diagnosis of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infection. Nucleocapsid (N) protein is the most abundant virus derived protein and strong immunogen. We aimed to find its efficient, low-cost production. SARS-CoV-2 recombinant fragment of nucleocapsid protein (rfNP; 58–419 aa) was expressed in E. coli in soluble form, purified and characterized biochemically and immunologically. Purified rfNP has secondary structure of full-length recombinant N protein, with high percentage of disordered structure (34.2%) and of β-sheet (40.7%). rfNP was tested in immunoblot using sera of COVID-19 convalescent patients. ELISA was optimized with sera of RT-PCR confirmed positive symptomatic patients and healthy individuals. IgG detection sensitivity was 96% (47/50) and specificity 97% (67/68), while IgM detection was slightly lower (94% and 96.5%, respectively). Cost-effective approach for soluble recombinant N protein fragment production was developed, with reliable IgG and IgM antibodies detection of SARS-CoV-2 infection.
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影响因子：
1.6
作者：
Zuo X;Mattern MR;Tan R;Li S;Hall J;Sterner DE;Shoo J;Tran H;Lim P;Sarafianos SG;Kazi L;Navas-Martin S;Weiss SR;Butt TR
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Butt TR
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作者：
Gorbalenya, Alexander E.;Baker, Susan C.;Ziebuhr, John
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Ziebuhr, John
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作者：
Long, Quan-Xin;Liu, Bai-Zhong;Huang, Ai-Long
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Maache, M;Komurian-Pradel, F;Paranhos-Baccalà, G
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作者：
Sun, Baoqing;Feng, Ying;Chen, Ling
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Chen, Ling