Laser capture microdissection enables cellular and molecular studies of tooth root development.
Laser capture microdissection enables cellular and molecular studies of tooth root development.
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DOI：
10.1038/ijos.2012.15
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发表时间：
2012-03
影响因子：
14.9
通讯作者：
Zhang H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sun JX;Horst OV;Bumgarner R;Lakely B;Somerman MJ;Zhang H
上皮-间充质相互作用(EMIS)对牙齿发育至关重要。在根形成过程中调节这些相互作用的分子机制还不是很清楚。激光捕获显微解剖(LCM)和随后的微阵列分析使得对牙根形成的大规模原位分子和细胞研究成为可能，但到目前为止，获得保存完好的RNA的未脱钙矿化牙齿或颌骨的完整组织切片的技术挑战阻碍了这一研究的进行。在这里，我们描述了一种克服这一障碍的新方法，该方法允许小鼠切牙和磨牙的牙齿上皮、邻近的间充质、成牙本质细胞和成牙骨质细胞在牙根发育过程中进行LCM。利用这种方法，我们获得了高质量的RNA样品，并成功地进行了微阵列分析。基因表达的显著差异，以及以前与根形成无关的基因，都被识别出来。微阵列的基因表达数据与实时逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的比较支持我们的发现。这些基因包括已知的牙齿上皮、间充质、成牙骨质细胞和成牙本质细胞的标记，以及新的基因，如菲布林家族的那些基因。总之，我们在组织准备方面的新方法使LCM能够收集保存完好的RNA的完整细胞，从而可以使用微阵列和RT-PCR进行后续的基因表达分析，以确定牙根发育的关键调控因素。
Epithelial–mesenchymal interactions (EMIs) are critical for tooth development. Molecular mechanisms mediating these interactions in root formation is not well understood. Laser capture microdissection (LCM) and subsequent microarray analyses enable large scale in situ molecular and cellular studies of root formation but to date have been hindered by technical challenges of gaining intact histological sections of non-decalcified mineralized teeth or jaws with well-preserved RNA. Here,we describe a new method to overcome this obstacle that permits LCM of dental epithelia,adjacent mesenchyme,odontoblasts and cementoblasts from mouse incisors and molars during root development. Using this method,we obtained RNA samples of high quality and successfully performed microarray analyses. Robust differences in gene expression,as well as genes not previously associated with root formation,were identified. Comparison of gene expression data from microarray with real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) supported our findings. These genes include known markers of dental epithelia,mesenchyme,cementoblasts and odontoblasts,as well as novel genes such as those in the fibulin family. In conclusion,our new approach in tissue preparation enables LCM collection of intact cells with well-preserved RNA allowing subsequent gene expression analyses using microarray and RT-PCR to define key regulators of tooth root development.
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影响因子：
4.3
作者：
Fong H;Chu EY;Tompkins KA;Foster BL;Sitara D;Lanske B;Somerman MJ
通讯作者：
Somerman MJ
影响因子：
4.3
作者：
Boabaid, F;Gibson, CW;Somerman, MJ
通讯作者：
Somerman, MJ
DOI：
10.1359/jbmr.091103
发表时间：
2010-05
期刊：
Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research
影响因子：
--
作者：
Huang X;Xu X;Bringas P Jr;Hung YP;Chai Y
通讯作者：
Chai Y
影响因子：
7.8
作者：
Harada, H;Kettunen, P;Jung, H S;Mustonen, T;Wang, Y A;Thesleff, I
通讯作者：
Thesleff, I
影响因子：
2.7
作者：
Huang, Xiaofeng;Bringas, Pablo, Jr.;Slavkin, Harold C.;Chai, Yang
通讯作者：
Chai, Yang