His-163 is a stereospecific proton donor in the mechanism of d-glucosaminate-6-phosphate ammonia-lyase.
His-163 is a stereospecific proton donor in the mechanism of d-glucosaminate-6-phosphate ammonia-lyase.
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DOI：
10.1002/1873-3468.14469
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发表时间：
2022-09
期刊：
影响因子：
3.5
通讯作者：
Gresham, Declan
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Phillips, Robert S.;Anderson, Kaitlin L.;Gresham, Declan
d -氨基葡萄糖- 6 -磷酸解氨酶（DGL）催化d -氨基葡萄糖- 6 -磷酸转化为2 -酮- 3 -脱氧戊二酸- 6 -磷酸，产物的C - 3具有立体特异性质子化。DGL的晶体结构表明His‐163可以作为质子供体。H163A突变型DGL在稳态反应中完全活跃，稳态前动力学与野生型DGL非常相似。然而，在反应过程中，H163A DGL在293 nm处积累了一个瞬时中间体，其λmax在野生型DGL中没有出现。此外，H163A DGL在D2O中反应的核磁共振分析表明，该产物是C‐3氘化非对映体的混合物。这些结果表明His‐163是DGL反应机制中的质子供体。His - 163是d -氨基葡萄糖- 6 -磷酸解氨酶由d -氨基葡萄糖- 6 -磷酸产生的2 -酮- 3 -脱氧- d -葡萄糖- 6 -磷酸C - 3上质子的立体特异性来源。这个质子化步骤不是速率决定的，但可能是必要的，以避免潜在的细胞毒性中间体的释放。
d‐Glucosaminate‐6‐phosphate ammonia‐lyase (DGL) catalyzes the conversion of d‐glucosaminate‐6‐phosphate to 2‐keto‐3‐deoxyglutarate‐6‐phosphate, with stereospecific protonation of C‐3 of the product. The crystal structure of DGL showed that His‐163 could serve as the proton donor. H163A mutant DGL is fully active in the steady‐state reaction, and the pre‐steady‐state kinetics are very similar to those of wild‐type DGL. However, H163A DGL accumulates a transient intermediate with λmax at 293 nm during the reaction that is not seen with wild‐type DGL. Furthermore, NMR analysis of the reaction of H163A DGL in D2O shows that the product is a mixture of deuterated diastereomers at C‐3. These results establish that His‐163 is the proton donor in the reaction mechanism of DGL. His‐163 is the stereospecific source of the proton on C‐3 of 2‐keto‐3‐deoxy‐d‐gluconate‐6‐phosphate produced from d‐glucosaminate‐6‐phosphate by d‐glucosaminate‐6‐phosphate ammonia‐lyase. This protonation step is not rate determining but may be necessary to avoid the release of a potentially cytotoxic intermediate.
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影响因子：
2.9
作者：
Phillips RS;Ting SC;Anderson K
通讯作者：
Anderson K
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4.8
作者：
Shen, Wangchen;Borchert, Andrew J.;Downs, Diana M.
通讯作者：
Downs, Diana M.
影响因子：
3.2
作者：
Miller, Katherine A.;Phillips, Robert S.;Hoover, Timothy R.
通讯作者：
Hoover, Timothy R.
DOI：
10.1016/0097-8485(90)80007-o
发表时间：
1990-01-01
期刊：
COMPUTERS & CHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
MATHESON, IBC
通讯作者：
MATHESON, IBC
影响因子：
6.4
作者：
Lambrecht JA;Schmitz GE;Downs DM
通讯作者：
Downs DM