Multipart DNA Assembly Using Site-Specific Recombinases from the Large Serine Integrase Family.
Multipart DNA Assembly Using Site-Specific Recombinases from the Large Serine Integrase Family.
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使用来自大丝氨酸整合酶家族的位点特异性重组酶进行多部分 DNA 组装。
DOI：
10.1007/978-1-4939-7169-5_19
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Olorunniji FJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Olorunniji FJ
在生命系统中设计新功能时，将多个 DNA 片段组装成功能性质粒是一个重要且通常是限速的步骤。噬菌体整合酶是一种酶，可在称为阿萨特位点的短的、确定的 DNA 序列之间进行有效的重组反应。这些 DNA 剪接反应可用于将大量 DNA 片段组装成功能性环状质粒，方法称为丝氨酸整合酶重组组装 (SIRA)。由此产生的 DNA 组装体可以通过同一整合酶在其重组方向性因子 (RDF) 存在下催化的进一步重组反应轻松进行修改。在这里，我们提出了一套用于噬菌体 phiC31 和 Bxb1 整合酶和 RDF 蛋白的过度表达和纯化、它们在 DNA 组装反应中的使用以及随后对所得 DNA 组装体进行修饰的协议。
Assembling multiple DNA fragments into functional plasmids is an important and often rate-limiting step in engineering new functions in living systems. Bacteriophage integrases are enzymes that carry out efficient recombination reactions between short, defined DNA sequences known asattsites. These DNA splicing reactions can be used to assemble large numbers of DNA fragments into a functional circular plasmid in a method termed serine integrase recombinational assembly (SIRA). The resulting DNA assemblies can easily be modified by further recombination reactions catalyzed by the same integrase in the presence of its recombination directionality factor (RDF). Here we present a set of protocols for the overexpression and purification of bacteriophageϕC31 and Bxb1 integrase and RDF proteins, their use in DNA assembly reactions, and subsequent modification of the resulting DNA assemblies.
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N. Craig
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