Interaction of HCMV UL84 with C/EBPalpha transcription factor binding sites within oriLyt is essential for lytic DNA replication.
Interaction of HCMV UL84 with C/EBPalpha transcription factor binding sites within oriLyt is essential for lytic DNA replication.
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DOI：
10.1016/j.virol.2009.06.035
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发表时间：
2009-09-15
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Pari, Gregory S.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kagele, Dominique;Gao, Yang;Smallenburg, Kate;Pari, Gregory S.
人巨细胞病毒 (HCMV) 裂解性 DNA 复制在顺式作用 oriLyt 区域启动，需要 6 个核心复制蛋白以及 UL84 和 IE2。尽管 UL84 被认为是复制起始蛋白，但对其与 oriLyt 的相互作用知之甚少。我们现在使用 UL84、IE2、UL44、CCAAT/增强子结合蛋白 (C/EBPα) 特异性抗体和跨越整个 oriLyt 区域的 PCR 引物进行染色质免疫沉淀测定 (ChIP)，以揭示跨 oriLyt 特异性蛋白质结合的评估。 UL84 与 oriLyt 的多个包含 C/EBPα 转录因子结合位点的区域相互作用。 C/EBPα（92,526 或 92535）位点之一的突变会使 oriLyt 失活，并导致 UL84 结合丧失。这些数据揭示了 oriLyt 内几种关键复制蛋白的相互作用区域，并表明 oriLyt 内 UL84 和 C/EBPα 位点之间的相互作用对于裂解性 DNA 复制至关重要。
Human cytomegalovirus (HCMV) lytic DNA replication is initiated at the cis-acting oriLyt region and requires six core replication proteins along with UL84 and IE2. Although UL84 is thought to be the replication initiator protein, little is known about its interaction with oriLyt. We have now performed chromatin immunoprecipitation assays (ChIP) using antibodies specific to UL84, IE2, UL44, CCAAT/enhancer binding protein (C/EBPα) and PCR primers that span the entire oriLyt region to reveal an evaluation of specific protein binding across oriLyt. UL84 interacted with several regions of oriLyt that contain C/EBPα transcription factor binding sites. Mutation of either of one of C/EBPα (92,526 or 92535) sites inactivated oriLyt and resulted in the loss of binding of UL84. These data reveal the regions of interaction within oriLyt for several key replication proteins and show that the interaction between UL84 and C/EBPα sites within oriLyt is essential for lytic DNA replication.
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