Sphingosine 1-phosphate lyase enzyme assay using a BODIPY-labeled substrate.
Sphingosine 1-phosphate lyase enzyme assay using a BODIPY-labeled substrate.
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DOI：
10.1016/j.bbrc.2009.01.106
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发表时间：
2009-03-06
影响因子：
3.1
通讯作者：
Saba, Julie D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bandhuvula, Padmavathi;Li, Zaiguo;Bittman, Robert;Saba, Julie D.
鞘氨醇1-磷酸裂解酶（SPL）负责鞘氨醇1-磷酸的不可逆催化，其通过五种膜受体传递信号以介导细胞应激反应、血管生成和淋巴细胞运输。SPL活性的标准测定利用放射性二氢鞘氨醇1-磷酸底物，并且昂贵且繁琐。在这项研究中，我们描述了一种SPL测定法，该测定法采用ω-标记的BODIPY-鞘氨醇1-磷酸底物，允许通过HPLC进行荧光产物检测，并结合了BODIPY荧光团的优点。通过与2，4-二硝基苯肼的反应确认了主要的醛产物。SPL催化的反应在30分钟内呈线性，BODIPY-1-磷酸鞘氨醇的Km为35 µM。
Sphingosine 1-phosphate lyase (SPL) is responsible for the irreversible catabolism of sphingosine 1-phosphate, which signals through five membrane receptors to mediate cell stress responses, angiogenesis, and lymphocyte trafficking. The standard assay for SPL activity utilizes a radioactive dihydrosphingosine 1-phosphate substrate and is expensive and cumbersome. In this study, we describe an SPL assay that employs an ω-labeled BODIPY–sphingosine 1-phosphate substrate, allowing fluorescent product detection by HPLC and incorporating advantages of the BODIPY fluorophore. The major aldehyde product is confirmed by reaction with 2,4-dinitrophenylhydrazine. The SPL-catalyzed reaction is linear over a 30 min time period and yields a Km of 35 µM for BODIPY–sphingosine 1-phosphate.
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